扶芳藤多糖的提取、分离、纯化及结构分析

论文摘要

扶芳藤属于卫矛属,是一种生长范围较广的藤条绿化植物,四处攀援生长,叶质柔软,叶子薄且呈椭圆形。扶芳藤也是一种中药材。在民间扶芳藤有岩青藤、万年青、换骨筋等多种称呼,其茎叶可以入药。据《本草拾遗》载,扶芳藤“味苦,小温,无毒”。功能与主治:舒筋活络,止血消瘀。治疗腰肌劳损,风湿痹痛,咯血,血崩,月经不调,跌打骨折,创伤出血。目前以扶芳藤茎叶为原料提取分离其小分子化学成分的研究取得了一些研究成果,对扶芳藤粗多糖的及生理活性研究发现粗多糖提取分离具有提高免疫功能的作用。但目前对扶芳藤多糖进行纯化分级、结构分析未见文献报道。本论文分为两部分,第一部分对扶芳藤的化学成分、生物活性研究进展,以及多糖的提取分离方法,构效关系研究进行了综述。第二部分详述了论文实验过程:扶芳藤多糖的提取分离、纯化分级和结构分析。经过石油醚、乙醚除脂去杂的扶芳藤茎叶粗粉,用热水浸取、过滤、浓缩、醇析、干燥后,得到深褐色的扶芳藤粗多糖。粗多糖经过脱蛋白和透析后,用Sephadex-75凝胶柱层析纯化得到一种纯化的多糖P1;用凝胶色谱法和比旋光度法鉴定多糖P1的纯度后,用红外光谱对其结构做了表征,使用乌氏粘度法测定了特性粘数,计算出了多糖的分子量。将多糖P1完全酸水解后,通过高效液相色谱法确定了多糖的组成。其中多糖P1由6种单糖组成;其中能够确认的有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、阿拉伯糖;通过质谱分析,可以推断的有半乳糖、半乳糖醛酸。通过1HNMR分析,进一步推断有甘露糖、葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖;通过高碘酸氧化,可以确定多糖链主要连接方式为1→4连接;Smith降解后,发现多糖的主要连接方式为1→4连接,有少量的1→6连接,而没有1→3连接;通过13CNMR分析,不仅确证了多糖P1的连接方式有α1→4连接,而且确证了有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖存在。根据上述实验结果和波谱分析,可以推断:扶芳藤多糖P1是由甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖构成,主要糖苷键构型为α-1→4连接,其次是1→6连接,没有1→2和1→3连接。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 扶芳藤化学成分研究及多糖的提取分离、结构分析方法
• 引言
• 1.1 扶芳藤的化学成分与药理作用研究
• 1.1.1 扶芳藤的化学成分
• 1.1.2 扶芳藤的药理作用
• 1.2 多糖的提取分离方法
• 1.2.1 多糖的脱脂
• 1.2.2 多糖的提取
• 1.2.3 多糖的除蛋白
• 1.2.4 多糖的脱色
• 1.2.5 多糖溶液中小分子的清除
• 1.2.6 多糖的纯化
• 1.2.7 多糖的纯度鉴定
• 1.3 多糖的分子量测定方法
• 1.3.1 膜渗透压法
• 1.3.2 光散射法
• 1.3.3 超离心法
• 1.3.4 凝胶过滤法
• 1.3.5 粘度法
• 1.3.6 高效液相色谱法
• 1.3.7 端基分析法
• 1.4 多糖结构分析
• 1.4.1 化学分析法
• 1.4.2 仪器分析法
• 1.4.3 生物分析法
• 1.5 多糖的药理作用
• 1.5.1 免疫作用
• 1.5.2 抗肿瘤作用
• 1.5.3 抗病毒作用
• 1.5.4 降血糖、血脂作用
• 1.5.5 抗衰老作用
• 1.5.6 抗氧化作用
• 1.6 多糖的构效关系
• 参考文献
• 第二章 扶芳藤多糖的提取
• 2.1 芳藤多糖的提取及初步理化性质的检验
• 2.1.1 试剂和材料
• 2.1.2 仪器
• 2.1.3 扶芳藤粗多糖的提取流程
• 2.1.4 粗多糖的初步理化性质检验
• 2.1.5 结论
• 2.1.6 提取法的讨论
• 2.2 多糖含量的测定
• 2.2.1 实验方法
• 2.2.2 实验结果
• 第三章 扶芳藤粗多糖的分离纯化
• 20₂ 法脱色方法'>3.1 H₂0₂法脱色方法
• 3.1.1 试剂
• 3.1.2 仪器
• 3.1.3 实验方法
• 3.1.4 结果
• 3.2 Sevage 法除蛋白
• 3.2.1 实验方法
• 3.2.2 结果
• 3.3 酶解法结合Sevage 法除蛋白
• 3.3.1 实验方法
• 3.3.2 结果
• 3.3.3 检验多糖脱蛋白效果
• 3.3.4 结论
• 3.4 除小分子杂质
• 3.4.1 实验方法
• 3.4.2 结果
• 3.5 多糖的纯化跟踪监测
• 3.5.1 纯化过程中多糖检测
• 3.5.2 实验方法
• 3.5.4 结果
• 3.6 多糖的纯化操作
• 3.6.1 Sephadex G-75 凝胶柱层析
• 3.6.2 实验结果
• 3.6.3 讨论
• 1的结构分析'>第四章 多糖P₁的结构分析
• 4.1 凝胶色谱法检验多糖的纯度
• 4.1.1 试剂
• 4.1.2 仪器
• 4.1.3 实验方法
• 4.1.4 实验结果
• 4.2 比旋光度法检测多糖的纯度
• 4.2.1 实验方法
• 4.2.2 结果
• 4.2.3 结论
• 1的结构分析意义'>4.3 多糖P₁的结构分析意义
• 1的分子量测定'>4.4 多糖P₁的分子量测定
• 1分子量原理'>4.4.1 粘度法测定多糖P₁分子量原理
• 4.4.2 试剂
• 4.4.3 仪器
• 4.4.4 实验方法
• 4.4.5 结论
• 4.4.6 讨论
• 1的单糖组分分析'>4.5 多糖P₁的单糖组分分析
• 4.5.1 多糖的完全酸水解
• 4.5.2 色谱条件
• 4.5.3 高效液相色谱分析
• 4.5.4 结果
• 4.5.6 结论
• 4.6 扶芳藤多糖P1高碘酸钠氧化和Smith 降解
• 4.6.1 高碘酸钠氧化
• 4.6.2 结果
• 4.6.3 结论
• 4.7 Smith 降解
• 4.7.1 实验方法
• 4.7.2 结果
• 4.7.3 结论
• 4.8 多糖中糖苷分析
• 4.8.1 实验方法
• 4.8.2 结果
• 4.9 讨论
• 4.9.1 红外分析
• 13CNMR 分析'>4.9.2¹³CNMR 分析
• 1HNMR 分析'>4.9.3¹HNMR 分析
• 4.9.4 质谱分析
• 4.10 结论
• 参考文献
• 致谢