猪肚菇水溶性多糖分离纯化和生物活性的研究

论文摘要

真菌多糖是一类从真菌的子实体或菌丝体分离出来的天然高分子化合物。研究表明真菌多糖具有抗病毒、抗凝血、降血脂、抗肿瘤、免疫调节、延缓衰老等多种生物活性,现已被开发成多种药物和功能性食品添加剂。随着天然药物化学、药理研究的不断深入,真菌多糖已引起国内外学者的极大兴趣,其重要生物学效应成为当今研究的热点。猪肚菇多糖（ZDG）作为一种珍贵食用真菌,由于对其研究还很少,因此具有重要的开发价值。本研究选择猪肚菇多糖,对其提取分离纯化工艺进行研究,并初步探讨其对实验小鼠在增强免疫力、抗疲劳、延长耐缺氧等方面的生物活性,为猪肚菇多糖作为药物提供实验依据。本研究实验内容如下:1、猪肚菇样品预处理采用超声波处理,70%乙醇浸泡的样品超声30min,再静置24h,此过程在提高多糖提取率的同时,同时也去除了部分蛋白质,有益于后续样品多糖的纯化。2、猪肚菇多糖的热水浸提工艺优化通过样品预处理、单因素实验、四因素三水平双目标监测正交实验优化。综合多糖提取率和蛋白质浸出率数据,确定最佳工艺条件为:提取温度90℃、浸提时间4h、料液比1:30、浸提次数3次。3、猪肚菇多糖的活性炭脱色效果对活性炭脱色效果,分别在用量、温度、时间几个方面进行考查,确定1%的活性炭在30℃下,脱色60min效果最佳。4、大孔树脂纯化猪肚菇多糖在9种大孔吸附树脂中进行筛选,选用AB-8型（规格30mm×300mm）大孔吸附树脂对猪肚菇多糖进行分离纯化。纯化条件为:洗脱速度:2mL/min;NaCl溶液浓度:0.2mg/mL。5、猪肚菇多糖的DEAE-纤维素分离取纯化猪肚菇多糖上DEAE-纤维素柱,用不同洗脱液洗脱,蒸馏水洗脱得一种中性多糖ZDG-1,0.1和0.3mol/L NaCl溶液分别洗脱得两种不同的酸性多糖ZDG-2、ZDG-3。6、猪肚菇多糖的单糖组分研究采用气相色谱法测定ZDG-2的单糖组分,结果表明主要是由D-甘露糖、D-半乳糖、葡萄糖三种单糖组分组成。7、猪肚菇多糖的生物活性研究用猪肚菇多糖对小鼠的免疫调节作用、常压耐缺氧实验、抗疲劳实验（游泳实验）等生物活性进行测试,结果显示猪肚菇多糖对实验小鼠在以上几个方面均表现出一定的促进作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 前言
• 1.2 真菌多糖的研究进展
• 1.2.1 真菌多糖的化学特性
• 1.2.2 真菌多糖的提取
• 1.2.3 真菌多糖的分离纯化
• 1.2.4 多糖的含量测定
• 1.2.5 多糖的纯度鉴定
• 1.2.6 多糖的相对分子质量测定
• 1.2.7 多糖的理化分析
• 1.2.8 食用菌多糖的生物活性
• 1.3 猪肚菇的研究状况
• 1.4 论文的目的和意义
• 第二章 猪肚菇多糖的分离纯化工艺研究
• 2.1 实验材料、试剂与仪器
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要试剂及化学用品
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 蒽酮-浓硫酸法测定多糖含量
• 2.2.2 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量
• 2.2.3 热水浸提猪肚菇多糖工艺设计
• 2.2.4 70%乙醇浸泡预处理对比实验
• 2.2.5 醇沉浓度实验
• 2.2.6 Sevag法去蛋白
• 2.2.7 脱色率的测定
• 2.2.8 猪肚菇多糖的活性炭脱色实验
• 2.2.9 大孔吸附树脂纯化猪肚菇多糖
• 2.2.10 透析法除小分子杂质
• 2.2.11 猪肚菇多糖的DEAE-纤维素柱层析
• 2.2.12 猪肚菇多糖的纯度测定
• 2.2.13 气相色谱法测定多糖的单糖成分
• 2.2.14 猪肚菇多糖的理化性质研究
• 2.2.15 猪肚菇多糖的热水浸提、纯化工艺流程
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 蒽酮-硫酸法测定猪肚菇多糖含量
• 2.3.2 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量
• 2.3.3 热水浸提猪肚菇多糖工艺设计实验
• 2.3.4 预处理对比实验
• 2.3.5 醇沉浓度实验
• 2.3.6 Sevag法除蛋白
• 2.3.7 猪肚菇多糖的活性炭脱色
• 2.3.8 大孔吸附树脂纯化猪肚菇多糖
• 2.3.9 透析法除小分子杂质
• 2.3.10 猪肚菇多糖的DEAE-纤维素柱层析
• 2.3.11 猪肚菇多糖的纯度测定
• 2.3.12 气相色谱法测定猪肚菇多糖的单糖组成
• 2.3.13 猪肚菇多糖的理化性质研究
• 2.3.14 小结
• 第三章 猪肚菇多糖生物活性的研究
• 3.1 材料
• 3.2 饲养环境
• 3.3 实验老鼠的制备
• 3.4 给药剂量
• 3.5 实验方法
• 3.5.1 猪肚菇多糖对实验小鼠的免疫调节作用
• 3.5.2 猪肚菇多糖对实验小鼠的常压耐缺氧实验
• 3.5.3 猪肚菇多糖对实验小鼠的抗疲劳实验
• 3.5.4 统计学处理数据
• 3.6 结果与讨论
• 3.6.1 猪肚菇多糖对实验小鼠的免疫调节作用
• 3.6.2 猪肚菇多糖常压耐缺氧实验
• 3.6.3 猪肚菇多糖抗疲劳实验
• 3.6.4 小结
• 第四章 总结
• 参考文献
• 致谢
• 附录