论文摘要
隐孢子虫（Cryptosporidium）是一种人畜共患的寄生性原虫,主要寄生于人和其它哺乳动物的胃肠道、禽类的呼吸道等粘膜的上皮细胞内,由它引起的疾病称隐孢子虫病。本研究应用DNA重组技术将微小隐孢子虫（Cryptosporidiumparvum）保护性抗原基因克隆入真核表达载体,构建单价及双价核酸疫苗,并在双价疫苗基础上插入了CpG-ODN免疫加强序列,将所构建的2个单价和2个双价核酸疫苗免疫动物,诱导产生了特异性免疫应答,并具有一定的保护作用。将重组质粒转染Hela细胞后,经G418加压筛选,得到稳定表达的细胞株。在4种重组质粒转染的细胞中用间接免疫荧光方法检测到特异蛋白,通过Westernblot试验证实所得蛋白具有反应原性。应用真核表达质粒在不同的条件下免疫BALB/c小鼠,对其诱导的免疫应答的动态变化进行检测,结果为4种重组质粒免疫鼠特异性抗体IgG滴度随着免疫次数的增加,呈现逐步升高趋势,4种质粒免疫鼠之间差异不显著（p＞0.05）,其中C,D组第三次免疫后IgG滴度与对照组相比差异显著（P＜0.05）,H组第三次免疫后IgG滴度与对照组相比差异极显著（P＜0.01）。试验组C、E、G小鼠的CD4+T淋巴细胞数和CD4+/CD8+T淋巴细胞数的值与对照组相比差异显著（P＜0.05）,试验组D、H组小鼠的CD4+T淋巴细胞数和CD4+/CD8+T淋巴细胞数的值与对照组相比差异极显著（P＜0.01）。对攻击感染具有较好的保护作用,试验组与对照组相比排出卵囊明显减少,排卵囊持续时间平均缩短3～4d,其中最佳免疫组减虫率可达到84.1%。将pVAX1-C-CP12-CP21b经鼻粘膜接种妊娠山羊,并对免疫山羊的后代进行攻虫试验。结果表明核酸疫苗能够诱导母羊产生免疫反应,随着免疫次数的增加抗体滴度逐渐增加,试验组与对照组相比差异极显著（p＜0.01）。接虫感染后,与对照组相比试验组山羊的后代每天排出卵囊数量明显减少,排卵囊持续时间较短（试验组12.5±1.13d,对照组14.4±1.27d）。试验组山羊的减虫率达到65.4%。