论文摘要
第一章青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637对急性期及恢复期溃疡性结肠炎小鼠模型的作用目的：建立DSS诱导的急性期和恢复期UC小鼠模型,探讨青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637诱导和维持UC缓解的作用,为临床UC活动期和缓解期治疗提供实验依据。方法：6-8周龄雌性BABL/c小鼠50只,体重20.0±2.0克,随机分为急性期正常组（N-7组）、嗜酸乳杆菌LT0637（LT0637-7组）、青春双歧杆菌BF0624组（BF0624-7组）、柳氮磺胺吡啶组（SASP-7组）和生理盐水对照组（NS-7组）以及恢复期N-17组、LT0637-17组、BF0624-17组、SASP-17组和NS-17组共10组,每组5只。采用自由饮用2.5%DSS（分子量3.6万-5万）7天建立小鼠UC模型,从实验第1天开始,给予青春双歧杆菌（2×108CFU/10g）、嗜酸乳杆菌（2×108CFU/10g）和柳氮磺胺吡啶（15mg/10g）灌胃治疗7天（急性期）和17天（恢复期）,观察小鼠每天的体重变化和粪便性状；邻甲联苯胺法检测小鼠粪便隐血情况；实验结束时处死动物,观察结肠大体观,留取从盲肠至肛门的全段结肠,测量其长度；HE染色观测结肠炎症情况,并进行组织学评分,评价不同菌株的益生菌对小鼠UC急性期和恢复期的影响。结果：1.饮用DSS小鼠出现毛色耸立干枯,精神萎靡,活动减少,大便稀软甚至腹泻,并有粪便隐血阳性和体重下降等,经LT0637、BF0624和SASP治疗后,动物体重下降变缓,腹泻和粪便隐血情况好转。在急性期LT0637菌株对体重减轻的保护强于BF0624菌株和SASP,而在恢复期,BF0624菌株比LT0637菌株和SASP更利于体重恢复。2.饮用DSS小鼠疾病活动积分（DAI积分；综合粪便性状、隐血和体重变化）显著增高,LT0637、BF0624和SASP能降低小鼠DAI积分,在急性期各组无明显差别,恢复期LT0637和BF0624效果强于SASP。3.UC急性期小鼠结肠肠壁变薄,肠道内可见不成形粪便和暗红色血便,结肠长度较正常小鼠明显变短（8.10±0.52cm）,而LT0637-7组、BF0624-7组和SASP-7组能阻止结肠缩短；UC恢复期小鼠结肠内粪便情况好转,结肠长度较急性期增加,LT0637-17组、BF0624-17组和SASP-17组结肠长度增加明显大于NS-17组,但结肠长度仍短于N-17组。4.饮用DSS小鼠结肠组织在显微镜下可见粘膜不完整、隐窝破坏、粘膜出血和少量的炎症细胞浸润。在急性期,BF0624和SASP对结肠组织学改变不明显,仅有LT0637减少隐窝的破坏和粘膜出血；各组的组织学评分为NS-7组：8.8±1.1,SASP-7组：7.4±1.9,BF0624-7组：7.6±2.5,LT0637-7组：6.0±1.0,N-7组：0。各组组织学评分均高于N-7组（P<0.05）,而LT0637-7组评分低于NS组（P<0.05）。恢复期LT0637-17组、BF0624-17组和SASP-17组评分均高于N-17组（P<0.05）,但低于NS-17组（P<0.05）。结论：1、DSS诱导的UC急性期和恢复期能出现UC急性发作和恢复期的特点,而且死亡率低,适用于轻中度UC急性期和缓解期的模型研究。2、青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳酸杆菌LT0637株能有效地减轻急性期小鼠UC炎症并维持恢复期炎症的缓解,且嗜酸乳酸杆菌LT0637和青春双歧杆菌BF0624在急性期和缓解期的作用并不完全相同,LT0637有利于诱导急性期UC的缓解,BF0624有利于缓解期的维持。第二章青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637菌株对急性期和恢复期溃疡性结肠炎小鼠模型Th1/Th2亚群的影响目的：观察UC小鼠外周血Th细胞（helper T cells）亚群Th1/Th2比例在急性期和恢复期的变化,分析青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637菌株对UC不同时期Th细胞分化的影响。方法：实验动物、分组、模型建立及给药方案与第一章相同,在实验结束时摘眼球采血,使用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞,用CD4抗体标记Th细胞膜表面特异性抗体,IL-4抗体和IFN-y抗体标记Th2和Thl细胞胞内相应抗原,流式细胞仪分析小鼠外周血Th细胞亚群的比例。结果：1.正常小鼠Th1/Th2比例约为0.84-0.96,饮用DSS的小鼠在急性期和恢复期均表现为比例增高。2.青春双歧杆菌BF0624、嗜酸乳杆菌LT0637菌株和SASP治疗7天和17天后,Th1/Th2比例均有不同程度的下降,与NS组比较有显著差别（P<0.05）,且两株益生菌效果强于SASP （P<0.05）。结论：DSS诱导的小鼠模型急性期和恢复期均出现Th1/Th2比例失衡,具体表现为比例增高；青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637菌株均可以降低急性期和恢复期Th1/Th2比例,且其作用强于SASP。第三章青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637菌株对急性期和恢复期UC小鼠治疗的免疫机制初步探讨目的：本部分实验主要分析青春双歧杆菌BF0624和嗜酸乳杆菌LT0637菌株治疗UC急性期和恢复期的免疫学机制。方法：实验动物、分组、模型的建立和给药方法同第一章,在急性和恢复期实验结束是处死动物留取各组结肠标本,免疫印记和半定量RT-PCR技术检测小鼠结肠黏膜内细胞因子TLR2、TLR4、PPARγ、NF-κB和T-bet的表达。结果：1.饮用DSS的小鼠在急性期和恢复期肠粘膜中TLR2、TLR4、NF-κB和T-bet表达明显上调（P<0.05）,PPARy明显下调（P<0.05）。γ2.给予益生菌和SASP治疗后可明显阻止肠粘膜TLR2、TLR4、NF-κB和T-bet的表达,同时促进PPARγ表达（P<0.05）。结论：1.嗜酸乳杆菌LT0637和青春双歧杆菌BF0624抑制UC急性期和恢复期TLR2、TLR4的表达,减少核转录因子的表达。2.嗜酸乳酸杆菌LT0637和青春双歧杆菌BF0624促进PPARγ的表达,从而减轻肠道炎症并维持缓解。
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