廿烷五烯酸协同顺铂对人肺癌A-549细胞株的影响

论文摘要

目的:在体外实验中,观察廿烷五烯酸对人肺癌A-549细胞株的抗增殖和诱导凋亡作用及其与顺铂联用的协同效应,为其成为防治肿瘤的药物提供实验依据。方法:选用人肺癌A-549细胞株进行体外培养,用MTT比色法测定廿烷五烯酸对人肺癌A-549细胞株的抗增殖作用。应用倒置显微镜、HE染色光学显微镜、AO/EB双染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化。通过TUNEL和AO/EB双染色法检测细胞凋亡率。应用FCM进行定量并作细胞周期分析。结果:①MTT实验结果表明:廿烷五烯酸在15μg/ml～60μg/ml范围内,于24、48、72、96小时对肺癌A-549细胞株均有抑制生长作用及协同顺铂的抗癌作用,并表现出浓度、时间依赖性关系。②HE染色:光镜下,实验组A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞核脱落,有的细胞膜起泡形成凋亡小体。倒置显微镜下,实验组A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱。AO/EB双染色荧光显微镜下,实验组A-549肿瘤细胞核染色质呈橘红色,胞质内的橘红色或橘黄色荧光消失,细胞周围可见亮绿色荧光的凋亡小体。③AO/EB双染色:细胞凋亡半定量方法结果,60μg/ml的EPA作用A-549肺癌细胞12、24、48、72、96小时,凋亡率分别为3.4%、9%、23%、13%、6%,不同时间段相比有统计学差异（p＜0.05或p＜0.01）。TUNEL染色法结果,当EPA浓度15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml时,细胞凋亡指数（AI）依次升高,分别为5.57±0.82%、11.68±1.26%、24.53±1.68%,不同浓度之间相比有统计学差异（p＜0.01）。④FCM检测:对照组细胞培养48h,凋亡率仅0.16%,未见亚二倍体峰;当15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml的EPA处理48小时时,细胞出现了凋亡峰,凋亡率分别为10.50%、19.87%、30.12%,不同浓度之间相比有统计学差异（p＜0.01）,EPA终浓度在15μg/ml～60μg/ml时,G0/G1期和G2/M期细胞百分比下降,S期细胞百分比上升,阻滞周期于S期。结论:1.体外实验中,廿烷五烯酸对人肺癌A-549细胞生长有抑制作用,呈明显的量效和时效关系。2.廿烷五烯酸与顺铂有协同作用,呈明显的量效和时效关系。3.经凋亡形态学、生物化学及流式细胞仪结果分析,廿烷五烯酸作用于人肺癌A-549细胞株后均出现肿瘤细胞的凋亡改变。4.廿烷五烯酸通过干扰细胞周期抑制人肺癌A-549细胞的生长,主要阻滞于S期。抑制肿瘤细胞增殖可能是廿烷五烯酸抗肺癌作用的机制之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略词表
• 第一章 引言
• 第二章 材料
• 第三章 方法
• 3.1 细胞复苏与培养
• 3.2 细胞分组及药物处理
• 3.3 倒置显微镜形态学观察
• 3.4 微量细胞培养四氮唑蓝实验法（MTT法）
• 3.5 HE常规染色光学显微镜形态学观察
• 3.6 AO/EB双染色荧光显微镜观察、检测细胞凋亡
• 3.7 TUNEL法检测细胞凋亡
• 3.8 流式细胞仪测定
• 3.9 统计学处理
• 第四章 结果
• 4.1 不同浓度EPA及联合顺铂对A-549肺癌细胞增殖的影响
• 4.2 A-549肺癌细胞的形态学改变
• 4.3 TUNEL法检测细胞凋亡
• 4.4 流式细胞仪检测及细胞周期的影响
• 第五章 讨论
• 第六章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 参考文献