首页> 正文

条斑紫菜（Porphyra yezoensis）R-藻红蛋白的生物修饰及活性保护研究

2020-12-17阅读(794)

条斑紫菜（Porphyra yezoensis）R-藻红蛋白的生物修饰及活性保护研究

论文摘要

我国紫菜栽培面积巨大,年产达到4万吨干品,是世界上第二大的紫菜生产国。但深加工技术落后,现有产品多为初级产品和粗产品,还未进入应用高新技术进行深层次的加工和利用。本研究拟采用我省资源丰富的紫菜为原料,制备了R-藻红蛋白,并对其结构特性进行了研究,通过酶修饰方法得到了体外活性较高的修饰产物；利用微胶囊技术将药品级藻红蛋白包埋,使其活性缓慢释放,研究具体结果如下：1.研究了条斑紫菜氨基酸组成成分。条斑紫菜经超声细胞破碎、硫酸铵二次盐析、结晶一周后,得到纯度为2.05的R-藻红蛋白,达到药品级要求（A562nm/A280nm>2）。R-藻红蛋白中,含有除色氨酸外的7种必需氨基酸,占氨基酸总量的37%,含量从高到低的顺序是：亮氨酸>缬氨酸>苏氨酸>异亮氨酸>赖氨酸>苯丙氨酸>蛋氨酸。在所有的氨基酸中,呈鲜味浓的谷氨酸的含量最多,其次是丙氨酸和天门冬氨酸。2.建立了木瓜蛋白酶修饰R-藻红蛋白的最佳工艺。木瓜蛋白酶酶浓度25000 u/g,pH 7,温度50℃,酶解时间4 h。通过测定酶解前后R-藻红蛋白的还原力和羟自由基清除率,证实经过水解后的R-藻红蛋白具有较强的还原力和抗氧化作用：还原力为0.573,较未酶解的藻红蛋白提高了2.35倍；清除羟自由基能力为51.03%,较未酶解的R-藻红蛋白活性提高了3.22倍。3.酶解后的R-藻红蛋白对人肉瘤细胞U20和人肝癌细胞HepG-2进行的48 h抑制作用研究结果表明,在实验剂量范围内,随R-藻红蛋白浓度的增加而抑制生长作用增大。其中,对人肉瘤细胞U20的IC50值为1271.46μg/mL,对人肝癌细胞HepG-2的IC50值为512.06μ/mL.4.研究以羧甲基壳聚糖/Cacl2为微胶囊壁材的最佳包埋条件：钙浓度7%,羧甲基壳聚糖浓度5%,PE浓度1.25mg/ml.其中,R-藻红蛋白的浓度对包埋率的影响是显著的。R-藻红蛋白在微胶囊前的还原力（A700）为0.24,羧甲基壳聚糖/Cacl2包埋后还原力为0.32,还原力提高了31.48%,在微胶囊化前的清除羟自由基能力为55.78%,微胶囊化后为68.64%,活性提高了23.05%,微胶囊技术的应用提高了藻红蛋白还原力及清除羟自由基能力。5.扫描电镜下可观察到经过冷冻干燥处理的羧甲基壳聚糖/Cacl2微胶囊表面光滑,内部的多孔结构的孔径由内到外逐渐变小,接近于表面时,变得较为致密,外表皮较薄,大约0.2μm。微胶囊中的释放行为研究表明,羧甲基壳聚糖/Cacl2可以有效控制藻红蛋白的释放。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第一章 文献综述
  • 1 紫菜藻红蛋白的研究进展
  • 1.1 藻红蛋白的提取、纯化方法
  • 1.2 藻红蛋白的理化特征
  • 1.3 藻红蛋白的生物活性及利用
  • 2 蛋白质酶解机理和活性肽的制备方法研究进展
  • 2.1 蛋白质酶解机理
  • 2.2 外源活性肽的消化吸收机制
  • 3 本研究的研究意义及主要研究内容
  • 3.1 本论文的研究意义
  • 3.2 本论文的主要研究内容
  • 参考文献
  • 第二章 R-藻红蛋白的酶解及酶解产物生物活性研究
  • 1 材料与方法
  • 1.1 主要材料及试剂
  • 1.2 主要仪器
  • 1.3 条斑紫菜原料的预处理
  • 1.4 条斑紫菜R-藻红蛋白的提取工艺流程
  • 1.5 DEAE Cellulose-52柱层析法纯化R-藻红蛋白
  • 1.6 条斑紫菜R-藻红蛋白浓度和纯度的测定
  • 1.7 紫外-可见光谱测定
  • 1.8 氨基酸组成分析
  • 1.9 还原力的测定
  • 1.10 清除羟基自由基能力的测定
  • 1.11 MTT法测定酶解前后R-藻红蛋白对细胞生长的抑制作用
  • 1.12 统计方法
  • 2 结果与讨论
  • 2.1 条斑紫菜R-藻红蛋白的纯度、提取率和回收率
  • 2.2 紫外-可见光谱
  • 2.3 氨基酸组成分析
  • 2.4 R-藻红蛋白水解酶的选择
  • 2.5 木瓜蛋白酶水解R-藻红蛋白最佳条件的确定
  • 2.6 木瓜蛋白酶水解藻红蛋白的正交试验
  • 2.7 藻红蛋白酶解产物的功能性评价
  • 2O和人肝癌细胞HepG-2的抑制作用'>2.8 酶解前后R-藻红蛋白对人肉瘤细胞U2O和人肝癌细胞HepG-2的抑制作用
  • 3 本章小结
  • 参考文献
  • 2微胶囊对R-藻红蛋白活性保护作用研究'>第三章 羧甲基壳聚糖/Cacl2微胶囊对R-藻红蛋白活性保护作用研究
  • 1 材料与方法
  • 1.1 主要材料及试剂
  • 1.2 主要仪器
  • 1.3 蛋白质含量的测定
  • 2微胶囊的制备'>1.4 羧甲基壳聚糖/CaCl2微胶囊的制备
  • 1.5 藻红蛋白包埋率的计算
  • 2微胶囊的缓释性能'>1.6 羧甲基壳聚糖/CaCl2微胶囊的缓释性能
  • 2 结果与讨论
  • 2.1 藻红蛋白浓度对包埋率的影响
  • 2.2 羧甲基壳聚糖浓度对包埋率的影响
  • 2浓度对包埋率的影响'>2.3 CaCl2浓度对包埋率的影响
  • 2.4 藻红蛋白包埋正交实验结果
  • 2.5 藻红蛋白包埋前后还原力比较
  • 2.6 藻红蛋白包埋前后清除羟自由基能力比较
  • 2.7 羧甲基壳聚糖/Ca微胶囊的扫描电镜
  • 2.8 藻红蛋白从微胶囊中的释放行为曲线
  • 3 本章小结
  • 参考文献
  • 全文结论
  • 全文创新点
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].葛仙米藻蓝蛋白和藻红蛋白的体外抗炎和抗紫外活性比较研究[J]. 食品工业科技 2019(17)
    • [2].红毛藻R-藻红蛋白的高效制备以及抗体标记与检测[J]. 食品工业科技 2012(17)
    • [3].坛紫菜R-藻红蛋白的稳定性研究[J]. 食品工业科技 2011(09)
    • [4].B-藻红蛋白在表面活性剂中的光谱性质[J]. 化学试剂 2009(06)
    • [5].藻红蛋白的高效异源生物合成及其生物活性[J]. 生物技术 2018(02)
    • [6].B-藻红蛋白多层复合薄膜的静电组装及其光谱特性[J]. 影像科学与光化学 2009(01)
    • [7].基于R-藻红蛋白及硫酸多糖提取的次等紫菜综合利用技术[J]. 海洋科学 2015(12)
    • [8].双水相分离纯化R-藻红蛋白[J]. 哈尔滨工业大学学报 2015(06)
    • [9].海生红藻多管藻中的2种R-藻红蛋白[J]. 烟台大学学报(自然科学与工程版) 2011(03)
    • [10].海生红藻多管藻中2种R-藻红蛋白的分离与分析[J]. 烟台大学学报(自然科学与工程版) 2019(03)
    • [11].R-藻红蛋白的提取方法的比较研究[J]. 哈尔滨商业大学学报(自然科学版) 2011(02)
    • [12].龙须菜藻红蛋白对H_(22)荷瘤小鼠免疫功能的影响[J]. 中草药 2010(08)
    • [13].纳米金粒子与R-藻红蛋白的相互作用[J]. 高等学校化学学报 2009(06)
    • [14].坛紫菜R- 藻红蛋白的提取技术研究[J]. 食品科技 2008(11)
    • [15].超声波协同酶解提取坛紫菜藻红蛋白工艺优化[J]. 食品与机械 2017(09)
    • [16].R-藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用[J]. 南京农业大学学报 2009(02)
    • [17].B-藻红蛋白/凝胶复合物的稳定性[J]. 华南理工大学学报(自然科学版) 2008(12)
    • [18].紫球藻蛋白和活性肽的研究进展[J]. 食品工业 2020(09)
    • [19].条斑紫菜R-藻红蛋白荧光探针制备条件优化[J]. 生物工程学报 2008(01)
    • [20].浊度、pH值及温度对光谱法检测海水中藻红蛋白含量的影响[J]. 光电子·激光 2016(06)
    • [21].藻红蛋白衍生比率荧光法检测消毒液中邻苯二甲醛[J]. 上海海洋大学学报 2019(06)
    • [22].眉藻PCC7601藻红蛋白α亚基基因克隆、表达及生物信息学分析[J]. 江苏农业科学 2011(05)
    • [23].条斑紫菜藻红、藻蓝蛋白逐级放大的纯化工艺[J]. 中国生物工程杂志 2010(01)
    • [24].响应面法优化复合酶法提取紫菜藻红蛋白工艺[J]. 食品科学 2015(06)
    • [25].新型光敏剂藻红蛋白在肿瘤光动力治疗中的研究进展[J]. 北京联合大学学报(自然科学版) 2015(04)
    • [26].利用纤维素酶辅助提取紫菜藻红蛋白的研究[J]. 水产科学 2009(05)
    • [27].硼胁迫对龙须菜生长及其生理特征的影响[J]. 南方水产科学 2014(04)
    • [28].论文题目不宜过长[J]. 科技导报 2013(10)
    • [29].重组藻红蛋白对H22荷瘤小鼠的调节与保护作用[J]. 中国新药杂志 2020(18)
    • [30].条斑紫菜藻红蛋白粗提方法比较[J]. 上海海洋大学学报 2012(03)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  ;  

    条斑紫菜（Porphyra yezoensis）R-藻红蛋白的生物修饰及活性保护研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5