金银花、山银花体外抗病毒与免疫增强活性研究

论文摘要

金银花药用历史悠久,传统经验及近代药理实验和临床应用证明金银花、山银花具有清热解毒、抗多种病原微生物、抗炎、免疫增强、清除自由基等作用。本研究选择传统中草药金银花和山银花,结合超声波法及细胞破碎法采用不同浓度的醇溶液提取金银花和山银花的两种主要活性成分绿原酸类和黄酮类,并利用超临界CO2萃取技术提取金银花和山银花的挥发油成分,分别从抗病毒活性和免疫增强作用两个方面来研究不同产地的金银花和山银花各种活性成分的药理作用,并对金银花和山银花的药效进行比较,以期对指导和开发金银花、山银花制剂提供一些试验依据。本试验通过在乙醇浓度在57%时主要提取金银花和山银花中的绿原酸类成分,在乙醇浓度为70%时主要提取黄酮类活性成分,利用旋转蒸发仪真空分别浓缩药液达浓度为1g生药/mL。利用CO2-SFE技术从河南封丘金银花、湖南隆回金银花和湖南溆浦山银花中萃取得到挥发油1.71g、4.17g和1.55g,萃取得率分别为1.22%、2.78%、1.03%;绿原酸类含量分别为2.72%、4.06%和3.14%;总黄酮类含量分别为5.55%、4.33%和5.17%。利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应（CPE）来评价金银花和山银花不同成分体外对伪狂犬病毒（PRV）、鸡新城疫病毒（NDV）对细胞感染的抑制作用,并通过MTT法检测细胞活性。结果表明:在安全浓度范围内,金银花和山银花黄酮类提取物、绿原酸类提取物和挥发油活性成分均具有显著的抗病毒作用。体外对PRV、NDV分别表现出显著的阻断病毒吸附,抑制病毒感染作用和中和病毒作用,且有一定的量效关系,金银花与山银花的抗病毒作用大体相当,差异不大。通过研究中药不同提取物对鸡脾淋巴细胞增殖的影响,探讨金银花和山银花的免疫增强作用,将四种安全浓度下的金银花活性提取物分别加入到体外培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养68h后,用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化。结果表明,金银花绿原酸类提取物、黄酮类提取物和挥发油类提取物均能促进淋巴细胞增殖及协同LPS、ConA的作用,金银花和山银花药效没有显著差异。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 文献综述 金银花药理作用研究进展
• 1 金银花主要活性成分
• 1.1 有机酸类
• 1.2 黄酮类化合物
• 1.3 挥发油
• 1.4 三萜皂苷类
• 2 金银花的药理作用
• 2.1 抗菌作用
• 2.2 消除耐药质粒、抑制内毒素作用
• 2.3 抗病毒作用
• 2.4 免疫增强、抗肿瘤作用
• 2.5 抗真菌作用
• 2.6 抗炎及解热作用
• 2.7 抗氧化作用
• 2.8 其他作用
• 3 前景与展望
• 引言
• 试验一 金银花和山银花活性成分的提取
• 1 试验材料
• 1.1 试验药材与药品
• 1.2 试验仪器
• 2 试验方法
• 2.1 挥发油类提取物的制备
• 2.2 绿原酸类活性物质的提取
• 2.3 绿原酸含量测定
• 2.4 黄酮类活性物质的提取
• 2.5 黄酮类物质的含量测定
• 3 结果与分析
• 3.1 挥发油类提取结果
• 3.2 绿原酸类提取物结果
• 3.3 黄酮类提取结果
• 4 讨论
• 2 萃取的原理与特点'>4.1 超临界CO₂萃取的原理与特点
• 4.2 金银花与山银花活性物质含量的影响因素
• 试验二 金银花、山银花活性提取物体外抗病毒作用
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验药物
• 1.1.2 毒株、细胞
• 1.1.3 试剂
• 1.1.4 仪器
• 1.2 方法
• 50 测定'>1.2.1 病毒TCID₅₀测定
• 1.2.2 金银花、山银花提取物对Vero 细胞安全浓度的测定（CPE 法）
• 1.2.3 金银花、山银花提取物对病毒的阻断作用测定
• 1.2.4 MTT 法检测细胞存活量
• 1.2.5 金银花、山银花提取物对病毒的抑制作用测定
• 1.2.6 金银花、山银花提取物对病毒的中和作用测定
• 2 结果
• 50 测定结果'>2.1 病毒TCID₅₀测定结果
• 2.2 金银花山银花提取物对Vero 细胞安全浓度测定结果
• 2.3 细胞培养与细胞病变
• 2.4 金银花、山银花提取物对病毒的阻断作用
• 2.4.1 挥发油对病毒的阻断作用
• 2.4.2 绿原酸类提取物对病毒的阻断作用
• 2.4.3 黄酮类提取物对病毒的阻断作用
• 2.5 金银花、山银花提取物对病毒增殖的抑制作用
• 2.5.1 挥发油对病毒的抑制作用
• 2.5.2 绿原酸类提取物对病毒的抑制作用
• 2.5.3 黄酮类提取物对病毒的抑制作用
• 2.6 金银花、山银花活性提取物对病毒的中和作用
• 2.6.1 挥发油对病毒的中和作用
• 2.6.2 绿原酸类提取物对病毒的中和作用
• 2.6.3 黄酮类提取物对病毒的中和作用
• 3 分析与讨论
• 3.1 不同产地金银花和山银花活性提取物体外抗病毒作用比较
• 3.2 金银花、山银花不同活性提取物体外抗病毒作用比较
• 试验三 金银花、山银花活性提取物对鸡淋巴细胞体外增殖的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 主要试剂
• 1.1.2 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 鸡脾脏淋巴细胞的制备
• 1.2.2 鸡脾脏淋巴细胞的培养和测定
• 1.2.3 数据分析
• 2 结果
• 2.1 中药提取物协同LPS 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 2.1.1 挥发油协同LPS 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 2.1.2 绿原酸类提取物协同LPS 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 2.1.3 黄酮类提取物协同LPS 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 2.2 中药提取物协同ConA 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 2.2.1 挥发油协同ConA 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 2.2.2 绿原酸类提取物协同ConA 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 2.2.3 黄酮类提取物协同ConA 对鸡脾淋巴细胞体外增殖的影响
• 3 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• ABSTRACT