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三种中药对NIH-3T3细胞增殖及胶原合成影响

2020-12-14阅读(993)

三种中药对NIH-3T3细胞增殖及胶原合成影响

论文摘要

实验通过血竭素高氯酸盐、乳香酸、没药提取物对NIH-3T3细胞的干预作用,检测NIH-3T3细胞的安全用药范围、细胞生长曲线、细胞周期时相变化、细胞上清中胶原蛋白、细胞上清中MMPs/TIMPs（MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2）等指标,探讨防腐生肌散促进创伤愈合的机理。该研究以NIH-3T3细胞为研究对象,采用MTT比色法观察血竭素高氯酸盐（DP）、乳香酸（MA）、没药提取物（ME）对NIH-3T3的细胞毒性作用和细胞生长曲线;采用流式细胞术检测NIH-3T3细胞周期的变化;利用羟脯氨酸试剂盒检测NIH-3T3细胞中胶原含量的变化;采用ELISA法检测NIH-3T3细胞分泌MMP-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2的含量。实验结果表明:（1）血竭素高氯酸盐、乳香酸、没药提取物对NIH-3T3细胞的安全用药浓度分别是:0.3125μg/L～40μg/L、125mg/L～8g/L、1.95mg/L～2g/L。在三种中药成分干预NIH-3T3细胞48h内,血竭素高氯酸盐明显地抑制细胞增殖,与对照组比差异极显著（P<0.01）,而乳香酸和没药提取物明显促进细胞增殖,与对照组比差异极显著（P<0.01）;各中药成分干预NIH-3T3细胞48h后对细胞增殖无影响。（2）随着干预时间的延长,血竭素高氯酸盐能明显地增高NIH-3T3细胞凋亡率,降低其存活率,具有统计学意义;乳香酸和没药提取物明显地降低细胞凋亡率,增高细胞存活率,与对照组相比差异极显著（P<0.01）。（3）血竭素高氯酸盐干预24h明显地促进胶原蛋白的合成,而干预细胞48h显著性降低了胶原蛋白含量,与对照组比差异极显著（P<0.01）;乳香酸干预24h时极明显地促进胶原蛋白的合成,与对照组比有极显著性差异,而在干预48h时胶原合成的能力降低,其含量与对照组无差异;没药提取物干预NIH-3T3细胞24h后抑制胶原蛋白的合成,差异极显著（P<0.01）,48h后促进胶原合成,但与对照组相比无统计学意义。（4）除对照组中MMP-2的产生与时效差异不显著外,各中药组和对照组中MMP-1、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2的产生均与时效有统计学意义（P<0.01）。结论:半数有效浓度的三种中药成分干预NIH-3T3细胞48h后,血竭素高氯酸盐能抑制NIH-3T3细胞增殖和胶原合成,促进NIH-3T3细胞凋亡,并能抑制TIMP-2、TIMP-1、MMP-1的表达,促进MMP-2、MMP-9的表达;乳香酸能促进NIH-3T3细胞增殖及持续合成胶原,抑制NIH-3T3细胞凋亡,并能促进MMP-2、MMP-9的表达,抑制MMP-1、TIMP-1、TIMP-2的表达;有效浓度的没药提取物促进NIH-3T3细胞增殖及胶原合成,抑制NIH-3T3细胞凋亡,并能促进MMP-2、MMP-9的表达,抑制MMP-1、TIMP-1、TIMP-2的表达。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 1 前言
  • 1.1 创伤愈合的中医学研究进展与应用
  • 1.1.1 改善创伤局部毛细血管网的微循环功能
  • 1.1.2 增强免疫系统的防御功能
  • 1.1.3 调节生长因子的表达
  • 1.1.4 调节胶原合成及防止病理性瘢痕的形成
  • 1.1.5 减轻组织缺血再灌注损伤作用
  • 1.1.6 传统中药方剂在创伤修复中的应用
  • 1.1.7 常用中药促创伤愈合的现代临床报道
  • 1.2 创伤愈合的生物学研究进展
  • 1.2.1 创伤愈合的生物学过程
  • 1.2.2 角质细胞与再上皮化
  • 1.2.3 内皮细胞与血管再生
  • 1.2.4 成纤维细胞与肉芽组织的形成及瘢痕化
  • 1.2.5 细胞凋亡与创伤愈合
  • 1.2.6 胶原与创伤愈合
  • 1.2.7 基质金属蛋白酶及组织抑制剂与创伤愈合
  • 1.3 研究目的与意义
  • 2 材料与方法
  • 2.1 实验材料
  • 2.1.1 细胞
  • 2.1.2 主要仪器
  • 2.1.3 主要试剂
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 NIH-3T3 细胞的传代培养和保存
  • 2.2.2 中药成分对NIH-3T3 细胞的药物毒性的影响
  • 2.2.3 中药成分对NIH-3T3 细胞增殖的影响
  • 2.2.4 中药成分对NIH-3T3 细胞细胞周期的影响
  • 2.2.5 中药成分对NIH-3T3 细胞胶原代谢的影响
  • 2.2.6 中药成分对NIH-3T3 细胞MMPs和TIMPs表达的影响
  • 2.2.7 统计方法
  • 3 结果与分析
  • 3.1 中药成分对NIH-3T3 细胞的细胞毒作用
  • 3.1.1 血竭素高氯酸盐对NIH-3T3 细胞的细胞毒作用
  • 3.1.2 乳香酸对NIH-3T3 细胞的细胞毒作用
  • 3.1.3 没药提取物对NIH-3T3 细胞的细胞毒作用
  • 3.2 中药成分对NIH-3T3 细胞增殖作用的影响
  • 3.2.1 血竭素高氯酸盐对NIH-3T3 细胞增殖的影响
  • 3.2.2 乳香酸对NIH-3T3 细胞增殖的影响
  • 3.2.3 没药提取物对NIH-3T3 细胞增殖的影响
  • 3.3 中药成分对NIH-3T3 细胞细胞周期的时间效应
  • 3.3.1 中药成分对NIH-3T3 细胞凋亡率的时间效应
  • 3.3.2 中药成分对NIH-3T3 细胞存活率的时间效应
  • 3.4 中药成分对NIH-3T3 细胞胶原代谢的时间效应
  • 3.5 中药成分对NIH-3T3 细胞MMPs和TIMPs表达的时间效应
  • 3.5.1 中药成分对NIH-3T3 细胞表达MMP-1 的影响
  • 3.5.2 中药成分对NIH-3T3 细胞表达MMP-2 的影响
  • 3.5.3 中药成分对NIH-3T3 细胞表达MMP-9 的影响
  • 3.5.4 中药成分对NIH-3T3 细胞表达TIMP-1 的影响
  • 3.5.5 中药成分对NIH-3T3 细胞表达TIMP-2 的影响
  • 附图
  • 4 讨论
  • 4.1 中药单体选择依据
  • 4.2 中药活性成分对NIH-3T3 细胞增殖和细胞周期的影响
  • 4.3 中药活性成分对NIH-3T3 细胞胶原代谢调控机理的研究
  • 5 结论
  • 致谢
  • 参考文献
  • 攻读硕士学位期间发表的学术论文

    • 相关论文文献

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