PLGA静电纺丝膜预防大鼠术后粘连的初步研究

论文摘要

目的：利用小鼠成纤维细胞和腹腔粘连大鼠模型,研究不同厚度的PLGA静电纺丝膜在预防腹腔粘连中的作用。方法：（1）将小鼠成纤维细胞NIH3T3接种到Ctrl+膜、160μm膜和60μm膜上,培养24h和48h,分别用CCK-8试剂盒、罗丹明-鬼笔环肽染色法和Live-Dead试剂盒检测细胞在膜上的增殖情况、形态以及存活死亡情况,以确定PLGA静电纺丝膜与细胞的兼容性。（2）将SD大鼠随机分成四组,用四种不同的手术方法处理。2周后将大鼠处死,解剖鉴定粘连情况,并测定腹腔灌洗液中乳酸脱氢酶（LDH）活性,血清中碱性磷酸酶（AKP）活性,血常规,并称量脏器重量。以评价构建的大鼠腹腔粘连动物模型。（3）将SD大鼠随机分成五组,其中两组是正常对照组和阴性对照组。用筛选出来的粘连动物模型制作方法进行手术处理,并将膜放置于可能产生粘连的部位。10天后将SD大鼠处死,分析观察不同厚度的PLGA静电纺丝膜在阻止大鼠腹腔粘连形成中的预防效果。结果：（1）小鼠成纤维细胞NIH3T3在Ctrl+膜、160μm膜和60μm膜上培养24h时后细胞活力分别为32%、12%和6%,48h时后活力分别为15%、11%和3%。细胞在PLGA静电纺丝膜上形态不规则且没有铺展开的细胞,大多数进入膜孔隙中；Ctrl+膜上的细胞都已经铺展开。PLGA静电纺丝膜上细胞死亡率非常低,Ctrl+膜上细胞死亡率极高,几乎没有存活的细胞。（2）四种方法建立的腹腔粘连动物模型的重度粘连发生率分别为66%、28%、50%和33%,相应的死亡率分别为40%、30%、60%和40%。腹腔灌洗液中的LDH和血清中的AKP活性、血常规、脏器重量都没有显著差异。（3）Ctrl-组、Ctrl+组、160μm组和60μm组粘连发生率分别为80%、14%、25%和71%,并发症发生率分别为83%、62.5%,12.5%和14%。结论：PLGA静电纺丝膜具有较好的细胞相容性,能够显著减少和减轻术后大鼠腹腔粘连和并发症的发生,大大改善了大鼠术后的生存质量。不同厚度PLGA静电纺丝膜对术后粘连的影响较大,较厚（160μm）的PLGA静电纺丝膜能显著减少术后粘连的发生率。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 英文缩略语索引
• 第一章 文献综述
• 1. 腹腔粘连
• 1.1 腹腔粘连的类型
• 1.2 腹腔粘连的诊断
• 1.3 粘连的发病机理
• 1.4 粘连的并发症
• 1.5 防治术后粘连的策略
• 2. 静电纺丝
• 2.1 静电纺丝的原理及制备方法
• 2.2 静电纺丝在生物及医学方面的应用
• 3. PLGA
• 3.1 PLGA的合成方法
• 3.2 PLGA的降解
• 3.3 PLGA在生物及医学方面的应用
• 4 本研究的目的及意义
• 第二章 PLGA静电纺丝膜的表征和细胞相容性检测
• 1 前言
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验材料和仪器
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 PLGA静电纺丝膜的电镜观察
• 2.2.2 CCK-8检测PLGA静电纺丝膜对细胞增殖的影响
• 2.2.3 PLGA膜上细胞形态的观察
• 2.2.4 PLGA膜上细胞死亡与存活检测
• 2.2.5 PLGA膜对蛋白的吸附作用
• 3 实验结果
• 3.1 PLGA静电纺丝膜的表征
• 3.2 PLGA静电纺丝膜对细胞增殖的影响
• 3.3 PLGA膜上的细胞形态
• 3.4 PLGA膜上细胞存活/死亡检测
• 3.5 PLGA膜对蛋白的吸附作用
• 4 讨论
• 5 小结
• 第三章 腹腔粘连动物模型的建立及筛选
• 1 前言
• 2 实验材料与方法
• 2.1 实验器材
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.2 实验动物和处理方法
• 2.2.1 实验动物及其饲养
• 2.2.2 动物模型的制作
• 2.2.3 动物的处死、腹腔灌洗液的提取及乳酸脱氢酶（LDH）活性的检测
• 2.2.4 血液采集
• 2.2.5 粘连程度的鉴定
• 2.2.6 并发症的统计
• 2.2.7 脏器的分离及保存
• 2.2.8 血清中碱性磷酸酶（AKP）的检测
• 3 实验结果
• 3.1 制作的腹腔粘连动物模型
• 3.2 腹腔灌洗液中乳酸脱氢酶（LDH）活性的检测
• 3.3 粘连的分值及统计
• 3.4 并发症统计
• 3.5 脏器的重量统计
• 3.6 血清中碱性磷酸酶（AKP）的活性检测结果
• 3.7 血常规
• 4 讨论
• 5 小结
• 第四章 PLGA静电纺丝膜在腹腔粘连动物模型中的应用
• 前言
• 1 实验材料与方法
• 1.1 实验器材
• 1.1.1 实验材料
• 1.1.2 实验仪器
• 1.2 实验动物和处理方法
• 1.2.1 实验动物及其饲养
• 1.2.2 实验动物的处理方法
• 1.2.3 实验动物的处死及处死后的处理
• 2 实验结果
• 2.1 LDH的检测结果
• 2.2 粘连的情况统计
• 2.3 并发症统计
• 2.4 脏器的重量统计
• 2.5 血清中碱性磷酸酶的检测结果
• 2.6 血常规
• 3 讨论
• 4 小结
• 第五章 结论与展望
• 1 主要结论
• 2 主要创新点
• 3 展望
• 参考文献
• 研究生期间发表的论文
• 致谢