肿瘤坏死因子-α对NIH3T3细胞成熟化作用的实验研究

论文摘要

目的：探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及其信号传导途径中特异性激酶抑制剂对NIH3T3细胞成熟化所起的作用。方法：体外培养NIH3T3成纤维细胞,将细胞分为空白对照组（A组）、TNF-α组（B组）及TNF-α+Anti-TNFRSFIB组（C组）。细胞制成2×105/mL的细胞悬液后,接种于25cm2培养瓶中,待细胞呈汇合状态时,换用无血清DMEM高糖培养基培养12-16h。然后A组换用含体积分数为0.02胎牛血清的DMEM高糖培养基继续培养；B组换用含100μg/L TNF-α的培养基培养；C组先加入浓度为50u g/L的Anti-TNFRSFIB作用于细胞1h后,倒出培养基后再加入含100μg/L TNF-α的培养基继续培养。然后采用RT-PCR法测定各组Ⅰ型胶原和基质金属蛋白酶3 （MMP3） mRNA的表达,Western Blot法测定各组Ⅰ型胶原蛋白和MMP3蛋白的表达。结果：MMP3无论是mRNA还是蛋白的表达B组和C组与A组相比均有显著性差异（t=-13.413-5.076,P<0.05）。其中B组与C组相比,差异也具有显著性（t=4.441-5.076,P<0.01）；Ⅰ型胶原二者的表达B组和C组与A组相比也均有显著性差异（t=-4.950-5.808,P<0.05）,B组与C组民较,差异显著（t=-4.950--3.823,P<0.05）。结论：与对照组相比,经TNF-α干预后,NIH3T3成纤维细胞中Ⅰ型胶原蛋白表达明显减少,而MMP3的表达量则增多。TNF-α促进了NIH3T3的活化。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一章 材料和方法
• 1.1 主要实验试剂
• 1.2 主要实验仪器
• 1.3 细胞培养
• 1.4 实验分组
• 1.5 半定量RT-PCR方法检测NIH3T3细胞MMP3和Ⅰ型胶原的mRNA表达
• 1.6 Western-blot方法检测NIH3T3细胞MMP3和Ⅰ型胶原的蛋白表达
• 1.7 统计学分析
• 第二章 结果
• 2.1 TNF-α对NIH3T3细胞MMP3以及Ⅰ型胶原的mRNA表达的影响
• 2.2 TNF-α对NIH3T3细胞MMP3以及Ⅰ型胶原的蛋白表达的影响
• 第三章 讨论
• 第四章 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 综述参考文献
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢