补体C3的免疫共振散射光谱分析

论文摘要

第一部分:绪论介绍了共振散射技术发展历史、分析应用以及发展前景。综述了金纳米微粒的制备、表征、组装和生物标记中的应用以及补体C3的分析进展。第二部分:免疫共振散射光谱分析法简便快速测定补体C3利用补体C3与羊抗人C3抗体在pH 6.0的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液和聚乙二醇（PEG）存在下发生特异性反应生成免疫抗体抗原复合物,导致体系在340nm处的共振散射峰增强,建立了一个测定补体C3的免疫共振散射光谱法。C3的浓度在0.167-3.33μg·mL-1的范围内,与340nm处的共振散射强度呈线性,回归方程为I340nm=0.1603C+12.42,R2=0.9926,检出限为0.058μg·mL-1。该方法具有试样用量少、简单快速的特点,用于定量分析人血清中的补体C3,得到的结果较为满意。第三部分:快速灵敏的免疫纳米金共振散射光谱探针测定补体C3采用改良柠檬酸钠还原法制备了粒径约为10.0nm的胶体金颗粒,在pH 7.5条件下制备了金标记羊抗人C3抗体共振散射光谱探针。在pH值为5.6的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液中及PEG存在下,金标记上羊抗人C3抗体与补体C3发生特异性结合,形成胶体金免疫复合物,导致体系在580nm处的共振散射强度急剧增强。补体C3浓度在0.00833-0.200μg·mL-1范围内与共振散射强度的增大值呈良好线性关系,检出限为0.0028μg·mL-1。此法用于人血清测定补体C3具有简便、快速等特点。获得较满意的结果。第四部分:纳米金标免疫抗体催化增强反应的共振散射光谱研究及其超痕量检测补体C3在pH 7.5条件下用金纳米颗粒标记羊抗人补体C3获得C3共振散射光谱探针。当pH值为5.6的Na2HPO4-C6H8O7缓冲溶液及PEG存在条件下,金标记羊抗人补体C3与补体C3发生特异性结合生成胶体金免疫复合物。以12000rpm速度离心分离获得未反应的金标抗上层溶液。以它作晶种,在pH 2.97柠檬酸钠-盐酸缓冲溶液-53.33μg·mL-1 HAuCl4-74.13μg·mL-1NH2OH·HCl溶液中及37℃条件下反应3分钟内,免疫金纳米微粒粒径表面积迅速增大,大大提高了585nm处金纳米微粒的共振散射强度I585nm。结果表明,随着C3浓度增大,离心上层溶液中金标抗浓度降低,I585nm线性降低。其降低值△I585nm与补体C3浓度在5.0-160.0pg·mL-1范围内呈良好线性关系,检出限为1.52pg·mL-1。本法具有灵敏、快速和高的特异性,用于定量分析人血清补体C3,结果满意。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一部分 绪论
• 1 共振散射技术发展历史、分析应用及发展前景
• 1.1 光散射技术研究概况及分类
• 1.2 共振散射技术发展概况及分析应用
• 1.2.1 蛋白质的分析应用
• 1.2.2 核酸的测定
• 1.2.3 药物及食品检测的分析应用
• 1.2.4 痕量金属离子和非金属离子的测定
• 1.2.5 液相纳米微粒的应用
• 1.2.6 催化反应中的应用
• 1.3 共振散射技术发展前景
• 2 金纳米微粒的制备、表征、组装及其分析应用
• 2.1 金纳米微粒的制备
• 2.2 金纳米微粒的表征
• 2.3 金纳米微粒的组装
• 2.4 金纳米微粒在生化标记中的应用
• 2.4.1 金标记在电镜中的应用
• 2.4.2 金标记在免疫电检测中的应用
• 2.4.3 金标记在免疫光检测中的应用
• 2.4.4 金标记在免疫层析中的应用
• 3 补体 C3 的分析进展
• 4 本课题研究的工作内容
• 5 本课题研究意义
• 6 参考文献
• 第二部分 免疫共振散射光谱分析法简便快速测定补体 C3
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 共振散射光谱
• 3.2 pH 值、不同缓冲溶液及用量选择
• 3.3 不同聚乙二醇浓度的影响
• 3.4 羊抗人补体C3 用量的影响
• 3.5 反应时间的影响
• 3.6 线性关系
• 3.7 共存物质的影响
• 3.8 样品的测定
• 4 参考文献
• 第三部分 快速灵敏的免疫纳米金共振散射光谱探针测定补体 C3
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 胶体金的制备
• 2.3 免疫纳米金共振散射光谱探针的制备
• 2.3.1 pH 值对金标记抗体的影响
• 2.3.2 羊抗人C3 抗体用量的确定
• 2.3.3 金标羊抗人C3 的制备
• 2.4 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 原理
• 3.2 紫外吸收图谱
• 3.3 共振散射光谱
• 3.4 pH 值、缓冲溶液的种类及用量的选择
• 3.5 PEG 浓度对体系的影响
• 3.6 金标记羊抗人 C3 抗体用量的影响
• 3.7 超声温育时间的影响
• 3.8 线性关系
• 3.9 共存物质的影响
• 3.10 样品分析
• 4 结束语
• 5 参考文献
• 第四部分 纳米金标免疫抗体催化增强反应的共振散射光谱研究及其痕量检测补体 C3
• 1 引言
• 2 实验部分
• 2.1 仪器与试剂
• 2.2 胶体金的制备
• 2.3 金标免疫共振散射光谱探针的制备
• 2.3.1 胶体金pH 的选择
• 2.3.2 金标羊抗人C3 抗体用量的确定
• 2.3.3 胶体金的标记
• 2.4 实验方法
• 3 结果与讨论
• 3.1 原理
• 3.2 透射电镜
• 3.3 扫描电镜
• 3.4 紫外可见吸收光谱
• 3.4.1 胶体金、金标羊抗人C3 及其免疫反应体系吸收图谱
• 3.4.2 不同浓度免疫金加强与不同粒径胶体金吸收光谱
• 3.4.3 不同时间紫外吸收光谱
• 3.5 共振散射光谱
• 3.6 胶体金免疫反应条件优化
• 3.7 免疫金加强条件优化
• 3.7.1 离心转速及时间选择
• 3.7.2 缓冲溶液的pH 值及用量选择
• 3.7.3 盐酸羟胺用量的选择
• 3.7.4 HAuC14 用量的选择
• 3.7.5 温度的影响
• 3.7.6 时间的影响
• 3.7.7 免疫金上层清液用量的影响
• 3.8 线性关系
• 3.9 共存物质的影响
• 4 样品分析
• 5 结论
• 6 参考文献
• 总结
• 攻读硕士学位期间发表的论文
• 致谢