续随子快繁和再生体系的建立

论文摘要

续随子（Euphorbia lathyris L.）,为大戟科（Euphorbiaceae）大戟属二年生草本植物,原产欧洲,多为人工栽培,适合生长在向阳山坡,现在我国各省市均有分布。续随子的干燥种子（千金子）可入药,具有破血散结、逐水消肿功效,可用于水肿,积聚腹胀,痰饮,癞瘕积聚,瘀血经闭,二便不通,外治顽癣、疣赘、疮痈、蛇伤、肝硬化、白血病等疾病的治疗；近年来,我国血吸虫病发病率逐渐升高,续随子的果实千金子是治疗晚期血吸虫病的特效药,还具有抗肿瘤作用。因此,市场对续随子的需求量呈快速增长,千金子的价格逐年提高。续随子又是一种理想的能源植物,种子含油率高达43-48%,其脂肪酸成分主要有：油酸、亚油酸、棕榈酸等,以C18、C16为主,总含量达99%以上。其中油酸含量达到83%。续随子体内含有大量的可发酵糖,发酵糖通过发酵产生酒精,剩余残渣还可以用来当作饲料。续随子除种子含油量高以外,植株含油量达到9.25%,全株均可以用来提炼石油,其炼制石油的工艺在国内外已趋成熟,因此,续随子作为一种理想的能源植物,具有广泛的开发前景和重要的经济价值。在自然条件下,续随子是以种子繁殖的,因其种子是药用部分,以种子繁殖势必降低其药材的产量。另外,续随子在苗期易发生立枯病,中后期易发生叶斑病、褐斑病,这些病害均造成了一定程度的减产。因此,采用生物技术解决以上问题迫在眉睫。本研究拟以河南禹州的续随子为材料,采用植物组织培养的方法,以MS为基本培养基（0.7%琼脂,1.5%蔗糖）,使用不同浓度的6-BA,建立了续随子快繁体系,使用6-BA和NAA不同浓度的组合建立了再生体系。为降低续随子在栽培中其种子的用量,达到间接提高产量的目的以及为进一步建立其遗传转化体系、为转基因育种等奠定基础具有重要的意义。主要研究结果如下：1.续随子种子灭菌和无菌苗的制备方法：将续随子剥皮的种子,在75%的酒精浸泡1min和0.1%HgCl2消毒6min,放入到I/2MS培养,培养温度控制在（26±1℃）,光照强度为1500-20001x,光照时间为16h/d,染菌率控制在0.55%之内。将生长15d无菌苗移出,切成小段作为组织培养的外植体。2.建立了续随子快繁体系：以MS为基本培养基（0.7%琼脂,1.5%蔗糖）,采用茎尖、茎干上部、茎干下部为外植体,最终选出茎尖、茎干上部作为适宜的外植体；MS+0.3mg/L6-BA诱导快繁芽,出芽率达到53%；MS+0.2-0.4mg/L6-BA对快繁芽增殖培养,壮芽培养基为I/2MS,选择生长状况良好的芽在1/2MS+0.2mg/LNAA诱导生根,60d后观察生根率为80%,平均每棵快繁苗生根12.2条,炼苗后,移栽到大田。3.建立了续随子再生体系：以MS为基本培养基（0.7%琼脂,1.5%蔗糖）,采用茎尖、茎干上部、茎干下部为外植体,最终选出茎尖、茎干上部作为适宜的外植体；在MS+1.0mg/L6-BA+0.2 mg/LNAA诱导愈伤组织,愈伤组织诱导率达到36.8%；在相同的培养基中继代培养,平均不定芽数为3.33个,壮芽培养基为1/2MS,选择生长状况良好的芽在1/2MS+0.2 mg/LNAA诱导生根,60d后观察生根率为80%,平均每棵快繁苗生根12.2条,炼苗后,移栽到大田。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩写词表
• 第一章 前言
• 1.1 文献综述
• 1.1.1 续随子的生物学特性
• 1.1.2 续随子的药用价值
• 1.1.3 续随子是理想的能源植物
• 1.1.4 续随子栽培及田间管理
• 1.1.4.1 选地、整地及播种
• 1.1.4.2 田间管理
• 1.1.4.3 采收
• 1.1.5 激素对续随子影响
• 1.1.6 6-BA、NAA在组织培养中的作用
• 1.1.6.1 6-BA在组织培养中的作用
• 1.1.6.2 NAA在组织培养中的作用
• 1.2 本研究的目的和意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 无菌苗的制备
• 2.2.2 快繁芽的产生
• 2.2.2.1 6-BA、KT诱导快繁芽
• 2.2.2.2 不同浓度的6-BA诱导快繁芽
• 2.2.3 再生体系中愈伤和芽的产生
• 2.2.3.1 2,4-D、NAA诱导愈伤
• 2.2.3.2 2,4-D,6-BA组合诱导愈伤
• 2.2.3.3 NAA,6-BA组合诱导愈伤和芽
• 2.2.4 快繁以及再生植株生根
• 2.2.5 培养基的制备
• 2.2.6 培养条件
• 2.2.7 数据分析方法
• 2.2.8 细胞形态的显微观察
• 第三章 结果与分析
• 3.1 无菌苗的制备
• 3.2 续随子快繁体系的建立
• 3.2.1 外植体的选择
• 3.2.2 6-BA、KT对续随子生长的影响
• 3.2.2.1 6-BA、KT诱导快繁芽
• 3.2.2.2 不同浓度的6-BA诱导快繁芽
• 3.2.3 续随子快繁植株的形成
• 3.3 续随子再生体系的建立
• 3.3.1 外植体的选择
• 3.3.2 2,4-D、NAA对续随子生长的影响
• 3.3.2.1 2,4-D诱导愈伤
• 3.3.2.2 NAA诱导愈伤
• 3.3.3 2,4-D和6-BA的组合对续随子生长的影响
• 3.3.3.1 2,4-D和6-BA的组合诱导愈伤
• 3.3.3.2 2,4-D和6-BA的组合诱导的愈伤分化
• 3.3.4 NAA和6-BA的组合对续随子生长的影响
• 3.3.4.1 NAA和6-BA的组合诱导愈伤
• 3.3.4.2 诱导愈伤和再生芽最佳NAA和6-BA组合的选择
• 3.4 续随子快繁和再生体系产生的植株生根
• 3.5 续随子组培苗的移栽
• 第四章 讨论
• 4.1 续随子再生和快繁体系外植体的选择
• 4.2 细胞分裂素对续随子快繁体系建立的影响
• 4.3 续随子再生体系中激素的使用
• 4.4 影响续随子组培苗生根的因素
• 4.5 影响续随子快繁体系芽诱导和再生体系愈伤和芽分化的因素
• 参考文献
• 致谢
• 图版及说明
• 图版1
• 图版2
• 图版3
• 图版4
• 图版5
• 图版6
• 图版7