海门山羊3个基因位点遗传多样性及其与产羔数的相关分析

论文摘要

为挖掘海门山羊多胎基因资源,建立多胎种羊群,培育高繁殖力海门山羊新品系提供基础材料,本试验以PRLR基因和FSHR基因做为两个候选基因,采用PCR-SSCP技术分析了这两个基因在海门山羊群体中的多态性及其与产羔数的关系,并分别对它们进行了数量遗传学分析。分析了海门山羊PRLR基因和FSHR基因3个基因位点的遗传变异（基因频率、杂合度、多态信息含量（PIC）和有效等位基因数）。PRLR基因内含子Ⅰ发现了两个等位基因A和B,且基因频率依次为:A为0.59,B为0.41,杂合度、有效等位基因数和PIC分别为:0.4838、1.9372、0.3668;PRLR基因内含子Ⅱ发现了两个等位基因C和D,且基因频率依次为:C为0.79,D为0.21,杂合度、有效等位基因数和PIC分别为:0.3318、1.4966、0.2768;而FSHR基因只发现一种等位基因,没有多态性。对海门山羊群体PRLR基因和FSHR基因3个基因位点与产羔数的关系进行了分析。结果表明,在海门山羊群体中,PRLR基因内含子Ⅰ有2种基因型,分别为AA型和AB型,PRLR基因内含子Ⅱ有3种基因型,分别为CC型、CD型和DD型,FSHR基因外显子10没有多态性;PRLR基因2个多态基因位点基因型与产仔数的最小二乘分析和多重比较表明,PRLR基因内含子Ⅰ两种基因型对海门山羊产羔数的影响差异不显著（P >0.05）;而PRLR基因内含子Ⅱ三种基因型对海门山羊产羔数的影响差异达到了极显著水平（P﹤0.01 ）,并且CC>CD>DD。对不同基因型个体测序结果表明,PRLR基因内含子Ⅰ的两种基因型AA型和AB型有在第95个碱基处有由T-C的突变,PRLR基因内含子Ⅱ的DD和CC型在第35个碱基处有由A-G的突变。结合上面的结果可以推测,PRLR基因内含子Ⅱ的等位基因C对海门山羊产羔数有正向作用,而D则有负向作用。综上所述,FSHR基因不适合作为选育高繁殖力海门山羊的候选基因,而根据文献资料和本试验的结果,PRLR基因可以作为高繁殖力海门山羊的一个候选基因,但该基因是否可以作为选育的主效基因,还有待进一步的研究。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 海门山羊的概况
• 1.1.1 海门山羊品种资源的优良特性
• 1.1.2 海门山羊品种资源利用存在的问题
• 1.2 催乳素受体基因的研究进展
• 1.2.1 催乳素受体基因的作用机理
• 1.2.2 催乳素受体基因与繁殖性能的相关性
• 1.3 促卵泡素受体基因的研究进展
• 1.3.1 促卵泡素受体基因的结构
• 1.3.2 促卵泡素受体基因转导促卵泡素的机制
• 1.3.3 促卵泡素受体基因与繁殖性能的相关性
• 1.4 SSCP（single-strand conformation polymorphism）技术的原理及应用.
• 1.5 本研究的目的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验山羊的来源
• 2.2 试验材料
• 2.2.1 试验药品
• 2.2.2 主要仪器设备
• 2.3 试剂的配制
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 羊耳组织DNA 的提取
• 2.4.2 DNA 浓度与纯度的检测
• 2.4.3 PCR 引物的选择及PCR 反应条件的确定
• 2.4.4 PCR 扩增产物的SSCP 分析
• 2.4.5 三个位点 SSCP 方法的优化
• 2.4.5.1 凝胶浓度及组分的优化
• 2.4.5.2 温度与电泳条件
• 2.4.5.3 上样缓冲液的组成
• 2.4.6 PCR 产物测序与分析
• 2.5 统计分析方法
• 2.5.1 分析方法
• 2.5.2 统计方法
• 3 结果与分析
• 3.1 基因组DNA 和PCR 产物结果
• 3.1.1 总DNA 提取结果
• 3.1.2 PCR 扩增结果
• 3.2 三个基因位点PCR-SSCP 的检测结果
• 3.2.1 PRLR 基因内含子Ⅰ（M1）的结果
• 3.2.2 PRLR 基因内含子Ⅰ的测序结果
• 3.2.3 PRLR 基因内含子Ⅱ（M2）的结果
• 3.2.4 PRLR 基因内含子Ⅱ的测序结果
• 3.2.5 FSHR 基因外现子10（M3）的结果
• 3.3 群体遗传学分析
• 3.3.1 三个位点在海门山羊群体中的基因频率和基因型频率及在海门山羊群体中的Hardy-Weinberg 平衡状态检验
• 3.3.2 三个位点在海门山羊类群中的遗传特性分析
• 3.3.3 多态基因位点基因型与产羔数的相关分析
• 4 讨论
• 4.1 样品保存及其DNA 的提取
• 4.2 影响PCR 扩增反应的因素
• 4.3 SSCP 结果的分析
• 4.4 两个基因的群体遗传特征
• 4.4.1 三个位点在海门山羊群体中的基因频率和基因型频率的变化
• 4.4.2 山羊群体中杂合度的变化
• 4.4.3 山羊群体在三个位点上多态信息含量的变化
• 4.5 三个基因位点与海门山羊产羔数的相关性分析
• 4.5.1 PRLR 基因两个位点对海门山羊产羔数的影响
• 4.5.2 FSHR 基因外显子10 对海门山羊产羔数影响的分析
• 5 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录