论文摘要
目的：研究重型再生障碍性贫血（SAA）患者树突细胞（DCs）数量和功能，探讨DCs及其对辅助性T淋巴细胞（Th）调控在SAA发病中的作用，阐述SAA的免疫发病机制。方法：研究对象为新发病的SAA患者（发病组）26例、经免疫抑制治疗达缓解或基本治愈的患者（恢复组）9例及正常对照16例。流式细胞术检测外周血mDCs（HLA-DR+Lin-CD11c+细胞）、pDCs（HLA-DR+Lin-CD123+细胞）数量。RT-PCR检测外周血单个核细胞（PBMNC）共刺激分子CD80、CD86 mRNA表达。体外以rhGM-CSF和rhIL-4诱导骨髓单核细胞来源的mDCs，与异体淋巴细胞做混合淋巴细胞反应（MLR），MTT比色法检测淋巴细胞增殖率，ELISA检测MLR上清IL-12、IFNγ水平，分析淋巴细胞增殖率与IL-12、IFNγ水平的相关性。RT-PCR检测PBMNC转录因子T-bet、GATA3 mRNA表达，ELISA检测血浆IFNγ、IL-4水平，分析T-bet mRNA表达与mDCs／pDCs比值、血浆IFNγ水平的相关性。结果：1．SAA发病、恢复组mDCs占PBMNC的比例分别为（0．44±0．25）％、（0．68±0．31）％，明显高于正常对照组[（0．29±0．10）％]（P＜0．05，P＜0．01）。三组pDCs占PBMNC分别为（0．20±0．20）％、（0．26±0．20）％、（0．29±0．13）％，三组间差异无统计学意义（P＞0．05）。SAA发病组和恢复组mDCs／pDCs比值分别为3．25±2．70和2．95±0．86，明显高于对照组（1．15±0．56，P＜0．01，P＜0．05）。尽管SAA恢复组mDCs高于发病组，但两组间mDCs／pDCs比值差异无统计学意义（P＞0．05）。2．发病组、恢复组、对照组PBMNC CD80、CD86 mRNA阳性表达率分别为88．4％、100％和68．8％。三组CD86 mRNA相对表达量分别为（1．42±0．16）、（1．06±0．12）和（1．10±0．07），发病组明显高于恢复组和正常对照组（P＜0．05）。三组CD80 mRNA相对表达量分别为（1．10±0．14）、（1．07±0．12）和（1．01±0．15），三组间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。3．当mDCs与淋巴细胞1：50接种时，发病组淋巴细胞增殖率为（322．13±171．07）％，明显高于恢复组[（180．90±79．12）％]和对照组[（192．25±91．93）％]（P＜0．05），恢复组和对照组之间比较差异无统计学意义（P＞0．05）。8例恢复期患者与4例正常对照DCs分别与正常淋巴细胞按1：100、1：50、1：20及1：10混合培养时，淋巴细胞增殖率均无统计学差异（P＞0．05）。比较不同来源的刺激细胞（mDCs）和淋巴细胞按1：50混合培养后的淋巴细胞增殖率，4组两两比较后发现仅发病患者-正常组与正常-正常组比较有统计学差异（P＜0．05），其余各组间比较均无统计学差异（P＞0．05）。mDCs与淋巴细胞比例为1：50培养时，发病组培养上清IL-12、IFNγ高于恢复组和对照组（P＜0．05），恢复组与对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。MLR上清液IL-12水平、IFNγ水平与淋巴细胞增殖率均呈正相关（r=0．529，P=0．001；r=0．381，P=0．024）。4．发病组、恢复组及对照组PBMNC T-bet mRNA相对表达量分别为0．37±0．07、0．20±0．07、0．17±0．05，发病组明显高于恢复组和对照组（P＜0．05）。三组中GATA3 mRNA相对表达量差异无统计学意义（P＞0．05）。发病组T-bet／GATA3比值为0．72±0．13，明显高于恢复组（0．33±0．08）和对照组（0．35±0．11）（P＜0．05）。SAA发病组患者血浆IFNγ水平[（50．9±1．1）pg／ml]显著高于恢复组患者[（49．7±0．9）pg／ml]与正常对照[（49．7±0．7）pg／ml]（P＜0．05）。T-bet mRNA表达与mDCs／pDCs比值呈显著正相关（r=0．445，P＜0．01），与血浆IFNγ水平呈显著正相关（r=0．402，P＜0．01）。结论：1．SAA发病期患者外周血mDCs比例增高，mDCs／pDCs比值失衡，虽然恢复期患者血象基本恢复，但mDCs比例和mDCs／pDCs比值仍高于正常对照组，因此临床治疗SAA不可过早停用免疫抑制剂，mDCs／pDCs比值可作为决定是否停药的一个指标。2．SAA发病患者PBMNC CD86 mRNA表达升高，骨髓单核细胞来源的mDCs刺激异体淋巴细胞增殖功能增强。淋巴细胞增殖率与培养液上清IL-12、IFNγ水平呈正相关，提示SAA发病期患者DCs功能增强。3．SAA发病患者PBMNC的与Th0细胞向Th1细胞极化有关的转录因子T-bet mRNA表达升高，且相对表达量与mDCs／pDCs比值、血浆IFNγ水平呈正相关，证实SAA为Th1型AID。血浆Ⅰ型淋巴因子水平升高与Th0细胞向Th1细胞极化有关，这一过程可能受上游mDCs控制。