非对称体细胞融合获得花椰菜（Brassica oleracea L.var.botrytis）与Brassica spinescens的种间杂种

论文摘要

本实验为了获得具良好原生质体培养能力的受体材料,对 12 个当地的甘蓝类蔬菜品种进行了原生质体培养及植株诱导能力的筛选实验。其中品种“0307”表现优良,可进一步用于体细胞杂交工作。同时得出结论:试材细胞分裂频率的高低和获得的愈伤数多少并不能衡量品种是否适合用来进行体细胞融合实验,而应以植株再生频率的高低作为筛选融合受体的标准。 利用非对称融合技术向芸薹属花椰菜中转移野生抗逆性状。供体 Brassica spinescens 具有光合效率高,抗白锈病、蚜虫、黑斑病和耐盐等优良特性。用经UV 处理的 Brassica spinescens 叶肉原生质体与花椰菜(0307)的下胚轴原生质体通过 PEG 融合,培养后获得 379 株再生植株。对其中的 120 株进行了过氧化物同工酶分析,证明有 23 株为杂种。对这 23 株植株进行的 RAPD 检测,证明有 17 株为杂种。流式细胞仪倍性分析表明,杂种植株核 DNA 含量全部高于供、受体亲本核 DNA 含量之和,植株倍性在四倍和八倍之间。实验还对供体 UV 射线处理的不同剂量进行了初步探索,结果表明 0.0750J/cm2为最佳辐射剂量。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 原生质体非对称融合
• 1.1.1 原生质体非对称体细胞融合的概念
• 1.1.2 原生质体非对称融合的特点
• 1.2 影响原生质体非对称融合中染色体丢失的因素
• 1.2.1 辐射种类
• 1.2.2 辐射剂量
• 1.2.3 亲本亲缘关系的远近
• 1.2.4 融合时原生质体所处的细胞周期
• 1.2.5 其他因素
• 1.3 体细胞杂种鉴定方法
• 1.3.1 杂种初期——愈伤组织生长期的鉴定
• 1.3.2 杂种植株形态特征鉴定
• 1.3.3 杂种植株细胞学鉴定
• 1.3.4 同功酶标记鉴定杂种植株
• 1.3.5 DNA 标记鉴定杂种植株
• 1.4 原生质体非对称体细胞融合的应用
• 1.4.1 转移胞质或核质互作雄性不育性状
• 1.4.2 缩短育种年限
• 1.4.3 转移植物抗逆性
• 1.4.4 转移其他优良性状
• 1.5 非对称融合存在的问题
• 2 试验材料和方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 材料的获得
• 2.1.2 仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 受体基因型的筛选
• 2.2.2 供受体原生质体制备
• 2.2.3 原生质体融合方法
• 2.2.4 原生质体培养
• 2.3 杂种鉴定
• 2.3.1 再生植株形态学鉴定
• 2.3.2 再生植株同工酶鉴定
• 2.3.3 RAPD 分子标记鉴定杂种植株
• 2.3.4 流式细胞仪鉴定杂种植株倍性
• 3 结果与分析
• 3.1 融合受体的筛选
• 3.1.1 受体基因型影响原生质体分裂能力
• 3.1.2 确定筛选融合受体的衡量标准
• 3.1.3 愈伤组织生长与原生质体培养时间长短相关
• 3.2 融合植株的获得和鉴定
• 3.2.1 叶肉原生质体酶解条件
• 3.2.2 融合植株的获得
• 3.2.3 杂种植株鉴定
• 3.2.4 形态学、同工酶和RAPD 分子标记鉴定杂种植株比较
• 4 讨论
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 作者简介