论文摘要
目的:观察随着凋亡率的增加NIT-1胰岛β细胞拉曼光谱的变化情况,揭示光谱学变化所反映的细胞生物学意义及高糖诱导细胞凋亡的可能机制,并为研究细胞凋亡探索新路径。方法:实验共分成7组:处理前组即对数生长期NIT-1细胞（NG0,HG0）;正常浓度（11.1 mmol/l）葡萄糖培养第2天（NG1）及第4天（NG2）;高浓度葡萄糖培养基（以下简称“高糖”）（ 25.0 mmol/l ）培养第2天（HG1）及第4天（HG2）;高糖培养第4天后漂浮在培养基中的细胞（HG3）。AnnexinV/PI染色流式细胞仪检测各组的凋亡率,激光光镊拉曼光谱仪检测细胞的拉曼光谱。细胞拉曼光谱经过背景扣除,平滑,基线矫正,归一化等处理。比较各组的凋亡率及分析光谱信息。将对数生长期与漂浮细胞组的光谱数据进行PCA分析。结果:1.流式细胞仪检测结果显示高糖组细胞凋亡率较对照组高,并且随着培养时间的延长高糖组的凋亡率逐渐增加,P<0.01。2.流式细胞仪显示高糖培养4天漂浮在培养基中的细胞大多数处于晚期凋亡状态。3.拉曼光谱结果显示随着高糖培养时间的延长1001 cm-1、1337 cm-1峰的峰面积逐渐降低,P<0.05。4.拉曼光谱显示漂浮的细胞在714 cm-1、781 cm-1、1001 cm-1、1086 cm-1、1125 cm-1、1337 cm-1、1447 cm-1、1655 cm-1峰的峰面积均较对数生长期细胞降低,P<0.01。5. PCA分析方法基本能将对数生长期与漂浮细胞的区分开。结论:1.高葡萄糖可以诱导NIT-1细胞凋亡。2.凋亡细胞内蛋白质与核苷酸的含量会降低,激光光镊拉曼光谱可以反映出此变化。3.利用主成分分析方法分析细胞拉曼光谱数据能很好的区分正常与高糖诱导的晚期凋亡细胞。