寄主为夹竹桃的红花桑寄生提取物（Nispex）诱导淋巴瘤细胞株CA46凋亡及其相关机制研究

论文摘要

目的:研究一种寄主为夹竹桃的红花桑寄生提取物（以下简称Nispex）对体外培养的人类Burkitt淋巴瘤细胞株CA46的抗肿瘤作用,并探讨了其抗肿瘤作用的分子机制。方法:应用MTT法研究Nispex对CA46细胞增殖的抑制效果,细胞集落培养观察Nispex对CA46中增殖细胞群的影响;AO-EB荧光染色法、末端原位标记（TUNEL）法、DNA凝胶电泳分析以及AnnexinV检测法检测细胞凋亡;RT-PCR检测Nispex作用前后bcl-2、bax、c-myc基因mRNA水平的变化,免疫荧光法检测Nispex作用后CA46细胞中NF-κB的核转移变化,Western blot检测Nispex对CA-46细胞中Ikk、IκB、NF-κBp65、Bcl-2、Bax、Caspase-3、PARP、C-myc凋亡相关蛋白表达的影响。结果:Nispex能明显抑制CA46细胞增殖;AO-EB荧光染色法、末端原位标记（TUNEL）法、DNA凝胶电泳分析以及AnnexinV检测法证实Nispex能有效诱导CA46细胞凋亡;RT-PCR检测到Nispex作用后CA46细胞bax基因mRNA表达增高,bcl-2、c-myc基因mRNA表达降低,免疫荧光法检测发现Nispex作用后CA46细胞核和细胞质中的NF-κB都明显的减少,Western blot检测出Nispex处理后CA46细胞的Bax、Caspase-3蛋白表达增高,Ikk、I-κB、Bcl-2、NF-κBp65、PARP、C-myc蛋白表达量降低。结论:Nispex能有效抑制CA46细胞增生并诱导其凋亡,这种作用可能与NF-κB信号通路有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中文文摘
• 第1章 绪论
• 1.1 课题背景
• 1.2 黄酮类化合物的结构和分类
• 1.3 黄酮类化合物抗肿瘤的途径
• 1.3.1 黄酮类化合物可以抑制细胞增殖
• 1.3.2 黄酮类化合物可干预肿瘤细胞凋亡信号传导途径
• 1.3.3 黄酮类化合物可阻滞肿瘤细胞周期诱导其凋亡
• 1.3.4 黄酮类化合物的抗氧化与促氧化作用
• 1.3.5 黄酮类化合物的的雌激素效应和抗雌激素、雄激素的作用
• 1.3.6 黄酮类化合物可以抗肿瘤体新生血管的形成
• 1.3.7 黄酮类化合物可以逆转肿瘤细胞的多药耐药性
• 1.3.8 黄酮类化合物促进抑癌基因表达和抑制癌基因
• 1.4 本课题研究意义
• 第2章 Nispex对CA46细胞抑制增殖的作用
• 2.1 前言
• 2.2 材料
• 2.2.1 药品、试剂及仪器
• 2.2.2 细胞株及培养条件
• 2.3 方法
• 2.3.1 MTT法绘制细胞增值曲线
• 2.3.2 细胞集落形成试验检测Nispex对CA46细胞集落形成的影响
• 2.4 统计分析
• 2.5 结果
• 2.5.1 MTT法检测Nispex对CA46细胞增殖的抑制作用
• 2.5.2 Nispex对CA46细胞集落形成的影响
• 2.6 讨论
• 第3章 Nispex诱导CA46细胞凋亡的检测
• 3.1 前言
• 3.2 材料
• 3.2.1 药品、试剂及仪器
• 3.2.2 细胞株及培养条件（见第2章2.2.2）
• 3.3 方法
• 3.3.1 AO-EB荧光染色
• 3.3.2 CA46细胞DNA片段化检测
• 3.3.3 CA46细胞TdT酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测
• 3.3.4 ANNEXIN V-FI双染流式细胞技术检测CA46细胞凋亡
• 3.4 结果
• 3.4.1 AO/EB荧光染色观察结果
• 3.4.2 DNA片段化检测结果
• 3.4.3 TUNEL检测结果
• 3.4.4 Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡结果
• 3.5 讨论
• 第4章 Nispex诱导CA46细胞凋亡的分子机制
• 4.1 前言
• 4.2 材料
• 4.2.1 药品、试剂、仪器
• 4.2.2 试剂配制
• 4.2.3 细胞株及培养条件（见第2章2.2.2）
• 4.3 方法
• 4.3.1 RT-PCR检测CA46细胞凋亡相关基因mRNA的表达
• 4.3.2 免疫荧光法检测Nispex作用后CA46细胞中NF-κB核转移变化
• 4.3.3 Western blot检测CA46细胞凋亡相关蛋白
• 4.4 结果
• 4.4.1 RNA完整性鉴定
• 4.4.2 Nipex对CA46细胞bcl-2、bax,c-myc基因mRNA的影响
• 4.4.3 Nispex对CA46细胞中NF-κB核转移的影响
• 4.4.4 蛋白质浓度测定标准曲线
• 4.4.5 Nispex对CA46细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响
• 4.5 讨论
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历