日本血吸虫性别差异表达分子Th细胞表位的预测及鉴定

论文摘要

血吸虫病是一种分布广泛、危害严重的人畜共患病。血吸虫为吸虫中罕见的雌雄异体，性别的分化对血吸虫的发育及致病起着至关重要的作用。雌雄虫合抱是血吸虫雌虫发育成熟和产卵的关键，成熟雌虫所产生大量虫卵而引起肝脏病变是造成宿主主要病理损害和疾病再传播的前提。本研究基于Th细胞介导的免疫效应机制可能在抗感染和抗生殖疫苗中发挥着主要作用这一事实，从日本血吸虫转录本组序列中筛选出性别差异表达分子，预测可能的Th细胞表位；同时对我们前期预测的分泌型分子的Th细胞表位进行免疫学鉴定，为进一步实验研究奠定基础。本研究应用基于计算统计法的数字差异展示技术从日本血吸虫转录本组序列中筛选性别差异表达分子，结合国家人类基因组南方研究中心提供的相关序列信息，对选出的序列进行注释分析；应用基于人工神经网络、隐马尔科夫模型、及权重矩阵分析等蛋白质二级结构预测算法软件，预测上述序列的信号肽及跨膜结构。应用基于结合基序、矩阵法和人工神经网络等方法的多个服务器，预测上述序列中与人、鼠的MHCⅡ类分子结合的肽；应用基于分子动力学算法的受体配体嵌合空间结合模拟服务器，预测肽与MHCⅡ分子的结合情况，得到候选的Th细胞表位。用人工合成多肽法(偶联到多聚赖氨酸骨架上)合成课题组前期预测出的日本血吸虫分泌型分子的5个候选Th细胞表位，MTT法和氚标记法测定候选表位体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞增殖的情况。结果共筛选到20个日本血吸虫性别差异表达分子全长序列，即9个雄虫高表达分子，11个雌虫高表达分子；序列的二级结构预测发现其中7个为分泌型整合蛋白质(2个雄虫高表达，5个雌虫高表达)，13个为非分泌型蛋白质；表位预测得到了与人和鼠MHCⅡ类分子结合的21个Th细胞表位，结构对接模拟预测优化确定了6个混杂型候选Th细胞表位，其中来源于雌虫、雄虫高表达分子的各有3个表位，即CSPYFVICTTKQYTR(AY814326；雌虫；分泌型假想蛋白质分子)、YLCFVFGIIQAIYIF(AY813676；雄虫；分泌型sj25四次跨膜超家族TE736分子)、SETLIQVWAVNKSVP (AY815950；雌虫；具泛素巯基酯酶活性)、EGSSVLVQRTHKSTS(AY810358；雌虫；具钙蛋白激酶活性)、FGLKRRDLIKDTM(AY812918；雄虫；具天冬酰氨肽链内切酶活性)以及AEPIRMILVAAGVEF(AY816103；雄虫；相似谷胱甘肽—S—转移酶)。对前期预测的表位实验鉴定结果显示：5个候选表位中有2个(VVOSIGYKFHRHGYE(AY222874)和STGFYLCTARSSLGS(AY222926)可刺激淋巴细胞增殖，且VVQSIGYKFHRHGYE表现出较强的刺激作用。本研究为进一步筛选血吸虫候选Th细胞抗原，包括筛选可能的抗生殖抗病理的T细胞抗原／表位分子，提供了初步的理论预测和实验鉴定依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 血吸虫及血吸虫病
• 1.2 血吸虫病疫苗的研究
• 第二章 日本血吸虫性别差异表达分子Th细胞表位的预测
• 第一节 日本血吸虫性别差异表达分子序列样本的获取及分子注释
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• +T细胞表位的预测'>第二节 日本血吸虫性别差异表达分子CD4⁺T细胞表位的预测
• 2.4 材料与方法
• 2.5 结果
• 2.6 讨论
• +T细胞表位的鉴定'>第三章 日本血吸虫分泌型蛋白质CD4⁺T细胞表位的鉴定
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 第四章 全文结论
• 4.1 日本血吸虫性别差异表达分子Th细胞表位预测
• +T细胞表位的鉴定'>4.2 日本血吸虫分泌型蛋白质CD4⁺T细胞表位的鉴定
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简历