Nrf2在小鼠非酒精性脂肪性肝病发病机制中的作用

论文摘要

核因子相关因子-2（Nrf2）与机体的防御系统密切相关,是细胞防御氧化应激的重要调节因子,通过介导一系列抗氧化酶和2相解毒酶的表达,可以保护多种组织免受有害物质的攻击。研究表明Nrf2在肝脏的功能稳定中起着重要的作用,可以降低药物介导的肝脏毒性、减轻肝脏炎症和肝纤维化、抑制化学致癌作用、并与肝细胞凋亡有关。深入研究可为治疗疾病带来新的途径,故在本实验中,观察Nrf2在非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）形成不同阶段表达的变化情况,为NAFLD的预防和治疗提供新的思路。目的本实验通过喂养昆明小鼠高脂高胆固醇的方法建立NAFLD小鼠模型,研究在脂肪肝和脂肪性肝炎两个阶段,Nrf2的表达及血浆8-异前列腺素F2a的变化情况,探讨Nrf2在氧化应激所致炎症损伤中的作用,为进一步阐明NAFLD的发病机制及治疗提供新的线索。方法健康成年昆明雌性小鼠26只,正常饲养适应环境1周后,随机分成2组：正常饮食组（对照组）10只,普通饲料喂养；高脂饮食组（实验组）16只,高脂饲料喂养。两组均自由饮水和进食分笼喂养于20-25℃明暗各12小时的动物实验室内,分别于8周末,12周末随机抓取5只对照组小鼠和8只实验组小鼠,处死前隔夜禁食,次日称重后以10％的水合氯醛（3-5ml/kg）腹腔注射麻醉,心脏穿刺取血,迅速摘取肝脏称肝湿重,后用10％的甲醛固定,制作石蜡切片,常规HE染色,观察肝脏组织的病理学变化,心脏血离心后取血清,应用7170-AHITAC全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、血糖、甘油三酯、胆固醇；运用免疫酶联法检测血浆中8-异前列腺素F2a的含量,用免疫组化法检测Nrf2的表达。结果1.对照组小鼠肝组织结构完整、清晰,肝小叶结构正常,中央静脉大而壁薄,肝细胞排列成肝索,在中央静脉周围呈放射状分布,细胞呈多边形。8周模型组小鼠肝细胞中度细胞水肿,多数肝细胞内可见大小不等、数量不一的脂滴空泡（脂肪变性）,以小叶中央区受累明显,伴有肝细胞水样变性。12周模型组小鼠出现弥漫性脂肪变性,呈现中至重度脂肪变性,小叶内炎症细胞浸润,浸润细胞以单核细胞、淋巴细胞为主,并有一些中性粒细胞浸润以及散在的点状坏死,汇管区炎症相对较轻但未见明显的纤维化改变。2.与对照组比较,8周模型组和12周模型组肝湿重量、肝指数、丙氨酸氨基转移酶、血糖、胆固醇均有显著升高（p<0.01）,总胆红素、甘油三酯水平差异不显著。3.对照组小鼠正常肝细胞中,Nrf2在极少数肝细胞胞浆中表达,8周实验组小鼠肝细胞中,Nrf2在受损肝细胞胞浆中较强表达,12周实验组小鼠肝细胞中,Nrf2在受损肝细胞胞浆中强表达,实验组小鼠8,12周末肝细胞胞Nrf2表达明显强于同期对照组小鼠（p<0.05）,且12周末明显强于8周末（p<0.05）4.与对照组比较,8周模型组和12周模型组血浆8-异前列腺素F2a明显升高,具有统计学意义（p<0.05）。结论1.采用高脂饲料喂养可以成功复制小鼠NAFLD模型,造模方法简便易行,模型成功率高,是一种较为理想的造模方法。2.随着高脂饮食喂养时间的延长,出现脂质代谢紊乱,炎症反应氧化应激,小鼠表现出单纯脂肪肝和脂肪性肝炎,8-异前列腺素F2a水平升高,Nrf2在肝细胞表达增强,提示随着非酒精性脂肪性肝病的发生和发展,Nrf2对氧化应激所致炎症损伤的保护作用增强。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 符号说明
• 1 前言
• 2 实验材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 附图表
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的学术论文
• 学位论文评阅及答辩情况表