WNK4基因和CYBA基因多态性与高血压病相关性的研究

论文摘要

目的：探讨WNK4基因G1662A多态性和CYBA基因C242T多态性与高血压病（原发性高血压）的相关性；探索一种简便快速的优化PCR条件的方法。方法：采用关联分析，严格按照标准对湖南地区汉族人群随机选取，其中高血压病患者135例，正常对照135例。用均匀设计对影响PCR反应的4个因素进行优化，应用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）对两组对象的WNK4基因G1662A多态性和CYBA基因C242T多态性进行分析。结果：（1）WNK4基因最佳的PCR反应条件为：退火温度59.8℃，模板30ng，镁离子1.0mmol／L，Taq酶1.5U；CYBA基因最佳的PCR反应条件为：退火温度58.1℃，模板20ng，镁离子1.5mmol／L，Taq酶1.5U。（2）正常对照组与高血压病组WNK4 G1662A基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（对照组X2=0.13，P＞0.05；高血压病组X2=0.31，P＞0.05），所选人群具有代表性。两组对象WNK4基因型的分布均以GG型最多，其次为GA型，而AA型最少，两组各基因型的频率无显著性差异（X2=3.57，P＞0.05），但两组等位基因的频率有显著性差异（X2=4.04，P＜0.05）。（3）正常对照组与高血压病组CYBA C242T基因型的分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律（对照组X2=3.62，P＞0.05；高血压病组X2=1.06，P＞0.05），所选人群具有代表性。两组对象CYBA基因型的分布均以CC多于CT型，而TT型缺如，两组对象各基因型的频率和等位基因的频率均无显著性差异，分别为（X2=3.76，P＞0.05）和（X2=3.32，P＞0.05）。结论：（1）均匀设计是优化PCR反应条件的有力工具。（2）在湖南汉族人群中，WNK4基因G1662A多态性与高血压病相关，等位基因A可能是高血压病的危险因素。（3）在湖南汉族人群中，CYBA基因C242T多态性与高血压病无显著相关性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 中英文词汇对照
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 标本
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.3.1 基因组DNA提取试剂的配制
• 2.1.3.2 其他试剂
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 一般临床资料的收集
• 2.2.1.1 血压、身高和体重的测量
• 2.2.1.2 生物化学指标的测定
• 2.2.2 外周血基因组DNA的提取
• 2.2.3 DNA完整性的鉴定
• 2.2.4 DNA的浓度和纯度测定
• 2.2.5 基因组DNA PCR扩增
• 2.2.5.1 均匀设计优化PCR条件
• 2.2.5.2 PCR扩增
• 2.2.6 1%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物
• 2.2.7 PCR产物限制性酶切消化
• 2.2.7.1 WNK4产物限制性酶切消化
• 2.2.7.2 CYBA产物限制性酶切消化
• 2.2.8 8%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测酶切产物
• 2.2.9 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 高血压病组与对照组的一般临床资料比较
• 3.2 WNK4基因PCR-RFLP（Hae Ⅲ）
• 3.2.1 均匀设计法优化WNK4基因PCR反应条件
• 3.2.2 图像分析软件Quantity One 4.4分析WNK4均匀实验结果
• 3.2.3 扩增WNK4基因
• 3.2.4 WNK4基因多态性分析
• 3.2.5 WNK4基因测序
• 3.2.6 高血压病组与对照组WNK4基因型的比较
• 3.3 CYBA基因PCR-RFLP（Rsa Ⅰ）
• 3.3.1 均匀设计法优化CYBA基因PCR
• 3.3.2 图像分析软件Quantity One 4.4分析CYBA均匀实验结果
• 3.3.3 扩增CYBA基因
• 3.3.4 CYBA基因多态性分析
• 3.3.5 高血压病组与对照组CYBA基因型的比较
• 第四章 讨论
• 4.1 均匀设计用于PCR反应条件的优化
• 4.2 WNK4与原发性高血压
• 4.3 CYBA与原发性高血压
• 4.4 问题与展望
• 第五章 结论
• 第六章 参考文献
• 第七章 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果