论文摘要
目的 初步建立MG胸腺组织蛋白质组学研究方法,获得双向电泳凝胶图谱,筛选出胸腺组织重症肌无力相关蛋白,并对其作出鉴定。从而寻找MG发病新线索,帮助临床诊断和治疗。 方法 (1)提取3例MG患者增生型胸腺组织蛋白,以7cm pH3-10 IPG胶条做第一向IEF,12%SDS-PAGE垂直电泳为第二向,分析二维电泳系统的重复性;以17cm pH3-10IPG胶条做第一向IEF,评价分别由样品裂解液Ⅰ和Ⅱ组成的两种不同胸腺组织蛋白提取方法。通过对这些实验条件的优化,获得MG增生型胸腺组织蛋白双向电泳凝胶图谱。 (2)分别利用异体MG患者血清、正常人血清和自身免疫病患者血清为第一抗体,与电泳转移到硝酸纤维素膜上的蛋白点孵育,做Western Blotting试验,在2-DE参考凝胶上挖取MG组特异显色点所对应的蛋白质点,经胰蛋白酶胶内酶切,对所得多肽混合物进行MALDI-TOF-MS分析,得到PMF数据,登陆http://prospector.ucsf.edu/ucs fhtm14.0/msfit.htm网站,用MS Fit程序在NCBInr.10.13.2004数据库检索,鉴定蛋白质。
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