四川烟草黑胫病菌生理小种鉴定及放线菌对黑胫病的生防研究

论文摘要

烟草黑胫病是广泛分布于我国各烟草主产区的重要病害,其病原（Phytophthoranicotianae）可以侵染危害烤烟、晾烟、晒烟、白肋烟、香料烟等所有栽培烟草,破坏力极强。开展烟草黑胫病菌生理小种的鉴定有助于了解其病原的生理分化情况,可为四川烟草品种布局和黑胫病防治提供重要有用的参考。放线菌是一类重要的生防微生物,具有较大的开发利用价值,用放线菌防治烟草黑胫病可避免烟草的农药污染和病菌抗药性等问题,是烟草生产中值得探索的新途径。本研究从四川烟草主产区收集了108份烟草黑胫病标样,采用髓部碟片分离法和组织分离法获得74株黑胫病菌。采用TTZ颜色反应和鉴别寄主法对74个菌株进行了生理小种鉴定,结果表明,四川烟草黑胫病菌存在0号和1号小种,供试菌株中0号小种占28.38%,1号小种占71.62%,属优势小种。两个小种在各采样区均有分布,以1号小种分布最广。采用稀释平板涂布法对采自四川烟草黑胫病发生区的29份根际土进行了分离,共获得239株放线菌。通过平板对峙培养法筛选得到48株对烟草黑胫病菌有拮抗活性的菌株,占筛选菌株的20.1%。根据形态和培养特征,48株拮抗放线菌被鉴定为链霉菌属（Streptomyces）和诺卡氏菌属（Nocardia）。链霉菌属占拮抗菌的97.92%,包括灰褐类群（Griseofuscus）、白孢类群（Albosporus）、淡红紫类群（Lavendulae）、球孢类群（Globisporus）、灰红紫类群（Griseorubroviolaceus）、金色类群（Aureus）、粉红孢类群（Roseosporus）等7类,其中灰褐类群和白孢类群为优势类群,分别占拮抗菌的41.67%和27.08%,其平均抑制率分别为54.73%和46.64%。淡红紫类群拮抗菌数量较少,但平均抑制率最高,为61.83%。对拮抗效果较好的菌株A20-8、A27-12、A30-9和A36-15分别进行了发酵条件优化测定,结果表明,其发酵液拮抗活性最好的发酵条件A20-8为pH7.0～8.0、28℃下培养4d,A27-12为pH8.0、24～28℃下培养8d,A30-19为pH8.0、24℃下培养8d,A36-15为pH8.0、28℃下培养8d。盆栽试验结果表明,4株放线菌对烟草黑胫病均具有不同程度的防治效果,以菌株A30-19效果最好,其防效为78.79%,与58%甲霜灵锰锌800倍液无显著差异,菌株A36-15,A27-12,A20-8对烟草黑胫病的平均防效分别是67.95%、57.41%、50.46%。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 1 前言
• 1.1 研究的目的意义
• 1.2 研究现状综述
• 1.2.1 烟草黑胫病的基本概况
• 1.2.2 烟草黑胫病的症状特点
• 1.2.3 烟草黑胫病病原菌的特征特性
• 1.2.3.1 烟草黑胫病菌的命名与分类地位
• 1.2.3.2 烟草黑胫病菌的生物学特性
• 1.2.3.3 烟草黑胫病菌的侵入和致病机理
• 1.2.3.4 烟草黑胫病的流行规律
• 1.2.4 烟草黑胫病菌的生理小种研究概况及鉴定技术
• 1.2.4.1 烟草黑胫病菌的生理小种研究概况
• 1.2.4.2 烟草黑胫病菌的生理小种鉴定技术
• 1.2.5 烟草黑胫病的综合防治
• 1.2.5.1 种植抗（耐）病品种
• 1.2.5.2 加强栽培管理措施
• 1.2.5.3 化学防治
• 1.2.5.4 生物防治
• 2 研究方案
• 2.1 主要研究内容与目标
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 样品的采集
• 2.2.2 病菌的分离与鉴定
• 2.2.3 烟草黑胫病菌生理小种的鉴定
• 2.2.3.1 TTZ颜色反应鉴定
• 2.2.3.2 鉴别寄主鉴定
• 2.2.4 土壤放线菌的分离
• 2.2.5 拮抗放线菌的初步筛选与鉴定
• 2.2.5.1 拮抗放线菌的初步筛选
• 2.2.5.2 拮抗放线菌的鉴定
• 2.2.6 放线菌发酵液的拮抗作用研究
• 2.3.6.1 培养时间对发酵液抑菌活性的影响
• 2.2.6.2 不同pH值对发酵液抑菌活性的影响
• 2.2.6.3 不同温度对发酵液抑菌活性的影响
• 2.2.6.4 发酵条件优化后放线菌发酵液的活性测定
• 2.2.7 温室盆栽烟苗防治效果测定
• 2.3 技术路线图
• 3 结果与分析
• 3.1 烟草黑胫病菌的分离与鉴定
• 3.1.1 烟草黑胫病菌的分离方法比较
• 3.1.2 烟草黑胫病菌的鉴定
• 3.2 烟草黑胫病菌生理小种类型及分布
• 3.2.1 TTZ颜色反应鉴定
• 3.2.2 鉴别寄主鉴定
• 3.3 放线菌对烟草黑胫病菌的拮抗作用
• 3.3.1 拮抗放线菌的初筛及鉴定
• 3.3.2 发酵液的室内拮抗作用测定
• 3.3.2.1 培养时间对发酵液抑菌活性的影响
• 3.3.2.2 不同pH值对发酵液抑菌活性的影响
• 3.3.2.3 不同温度对发酵液抑菌活性的影响
• 3.3.2.4 发酵条件优化放线菌发酵液抑菌活性的测定
• 3.3.3 放线菌发酵液对烟草黑胫病的温室盆栽防效
• 4 讨论
• 4.1 烟草黑胫病菌的分离
• 4.2 烟草黑胫病菌生理小种的鉴定
• 4.3 拮抗放线菌的分离筛选
• 4.4 放线菌发酵液的室内拮抗作用研究
• 4.5 放线菌发酵液盆栽防效试验
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文