运用蛋白质芯片技术鉴定干扰素的亚型

论文摘要

目的 研制干扰素（interferon,IFN）单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定。采用自制和惠赠的干扰素单克隆抗体,在本实验室建立的金基底蛋白质芯片平台上对IFN-α1b、IFN-α2a、IFN-α2b、IFN β及IFN γ进行鉴定。方法 采用B淋巴细胞杂交瘤技术,以rIFN-α 2b为抗原,免疫Balb/c小鼠,取脾细胞与SP2/0,经PEG融合,在HAT选择培养基中培养两周,用ELISA方法鉴定阳性克隆、有限稀释法筛选单克隆细胞株,并对其进行特性分析:分析染色体核型;用Sigma公司的鼠单抗定型ImmunotypeTM试剂盒进行亚型分析;用Westen blot方法检测单克隆抗体的特异性;用间接ELISA方法,测定了相对亲和常数。金基底蛋白质芯片用已知亚型的IFN半成品包被,封闭后与自制和惠赠的6株干扰素单抗反应,再与Cy3-羊抗鼠TgG反应,反应后GenePix4100A芯片扫描仪扫描读数,将结果与ELISA法、Western blot法比较。同样方法检测IFN成品。结果 获得了1株稳定分泌干扰素抗体的杂交瘤细胞株,效价高达1:5000。其染色体数目为100条左右,所分泌抗体亚型为IgG2b,亲和常数为1.56×104L/mol。金基底蛋白质芯片检测技术结果表明,该平台鉴定干扰素的亚型具有特异性,与ELISA法、Western blot法能得出一致的结论。结论 成功地研制了干扰素的单克隆抗体细胞株,运用本实验室建立的蛋白质芯片平台可以对干扰素的亚型进行鉴定,具有高通量,操作简单,样品用量少,重复性强等优点。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 （干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定）
• 摘要（中文）
• 摘要（英文）
• 1.引言
• 2.材料与方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 参考文献
• 第二部分 （运用蛋白质芯片技术鉴定干扰素的亚型）
• 摘要（中文）
• 摘要（英文）
• 1.引言
• 2.材料与方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 5.结论
• 参考文献
• 本课题的进一步设想
• 致谢
• 附录
• 综述（蛋白质芯片技术的分类、研究与应用进展）
• 一、蛋白质芯片的分类
• 二、蛋白质芯片的研究与应用进展
• 三、展望
• 参考文献