离子交换整体柱在分离纯化蛋白质及体内药物分析方面的研究

论文摘要

离子交换整体柱是近年来发展的一种新型高效液相色谱柱，已广泛应用于蛋白质、肽、核酸、寡核苷酸以及多糖的分离和纯化。它的优点是：1) 具有开放性支持骨架，大分子可以自由进入和迅速扩散，可用于快速分离和制备；2) 具有多孔性，表面积大、交换容量大；3)具有亲水性，对大分子的吸附较弱，不致引起生物大分子变性或酶的失活，活性回收率高；另一方面，它还可以作为固相萃取(SPE)介质用于痕量样品分析前的预富集，与常规富集方法相比，具有有机溶剂用量少、便捷、安全、高效、易实现自动化在线分析等特点。 本文通过原位聚合之后在线化学修饰的方法合成了连续棒状离子交换柱，研究了它对于生物大分子的吸附特性，以及对血液中痕量药物的在线富集和测定中的应用。全文共分三部分。 第一章：综述了离子交换色谱法中有机基质、无机基质以及复合基质固定相的研究进展，并对其在生化研究中的应用作了介绍。 第二章：以色谱柱柱管为模具通过原位聚合法合成了整体柱，分别用乙二胺、二乙胺、三乙胺将其在线修饰为以氨基为交换基的阴离子交换整体柱，三种色谱柱均具有背压低，适用pH范围广，亲水性强的特点。三种色谱柱均可用于溶菌酶、谷胱甘肽和牛血清白蛋白的分离，二乙胺修饰柱可以对纤维素降解酶进行分离纯化在工业生产中可起到降低生产成本，提高利用率的作用，也证明了通过多步梯度洗脱对某些蛋白质的分离纯化是可行的。 第三章：以色谱柱柱管为模具通过原位聚合法合成了整体柱，分别用乙二胺、一氯乙酸将其在线修饰为以羧基为交换基的弱阳离子交换整体柱。该整体柱可成功的去除蛋白质并同时富集药物，避免了繁琐的样品预处理。该方法具有较高的精密度及回收率，柱压和柱效在两个月内无明显变化。为检测血液中的痕量药物提供了一种简单、经济、有效的方法。

论文目录

• 第1章 综述
• 1.1 引言
• 1.2 离子交换色谱法的理论基础
• 1.3 离子交换色谱固定相的研究进展
• 1.4 离子交换色谱固定相的问题及展望
• 第2章 经修饰的阴离子交换整体柱对蛋白质的分离与纯化
• 2.1 前言
• 2.2 实验部分
• 2.3 结果与讨论
• 2.4 结论
• 第3章 在线修饰连续棒状阳离子交换柱去除蛋白质并同时富集药物的研究
• 3.1 前言
• 3.2 实验部分
• 3.3 结果与讨论
• 3.4 结论
• 参考文献
• 致谢
• 已发表和待发表的论文
• 参与课题项目