论文摘要
背景和目的随着世界人口老龄化，慢性脑缺血已经成为威胁人类的重要临床难题。但是，目前的研究多集中在急性脑缺血尤其是短暂脑缺血后再灌注方面，而在慢性脑缺血方面研究甚少，与急性脑缺血相比，慢性脑缺血具有较长的临床前期可供干预，研究慢性脑缺血的机制可能为其深入研究和临床治疗提供合适的策略。有研究表明核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）是参与缺血性脑损伤的两种重要炎症反应因子。但在慢性脑缺血后NF-κB、COX-2表达的基础研究罕见报道。丁基苯酞（3-n-butylphathlide，NBP）是中国医学科学院药物研究所研制开发的一类新型抗脑缺血药物，对急性缺血性脑卒中有明显疗效。但有关丁基苯酞在慢性脑缺血中的治疗作用研究甚少。本课题关注在慢性脑缺血后转录因子NF-κ3激活和下游基因COX-2表达在慢性脑缺血的炎症反应中的作用，探讨丁基苯酞在慢性脑缺血中的抗炎作用，为丁基苯酞治疗慢性脑缺血的临床应用提供理论基础。材料与方法健康Wistar大鼠100只，体重450-550g，随机分为5组，每组20只。A组：对照组（假手术+溶剂）；B组：模型组（手术+溶剂）；C组：缺血高剂量治疗组（手术+高剂量NBP+溶剂）；D组：缺血低剂量治疗组（手术+低剂量NBP+溶剂）；E组：预防组（预防剂量NBP+手术+溶剂）。溶剂为消毒后的精制花生油。C组和D组双侧颈总动脉结扎术（2VO）后2月分别给予12mg／100g／d、6mg／100g／d丁基苯酞灌胃；A组和B组每日给予消毒后的精制花生油2ml灌胃，E组在2VO术前1月给予8mg／100g／d灌胃，连续灌胃1月。3月后，处死大鼠，常规灌注取脑，制备标本。采用光镜及免疫组织化学方法对各组大鼠海马CA1区及颞叶皮层组织形态学、NF-κB p65及COX-2的表达进行检测。统计学处理：数据以均数士标准差（x士s）表示，然后运用SPSS14.0统计软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），多个样本均数的两两比较用q检验法。取α=0.05作为检验水准。结果1．HE染色：假手术组海马CA1区及颞叶皮层神经元偶有变性、坏死，大部分细胞形态正常未发现明显的病理变化，单纯缺血组大鼠海马CA1区及颞叶皮层神经元数目明显减少，可见大量变性、坏死的神经元，大剂量丁基苯酞治疗后，变性坏死的神经元明显减少，正常细胞数低于假手术组，小剂量丁基苯酞治疗组大鼠海马CA1区及颞叶皮层变性、坏死的神经元也有所减少，但高于大剂量组。预防组和单纯缺血组大鼠比较，预防组可见较少的变性、坏死神经元，细胞数量较多，排列较规则。2．NF-κB p65免疫组化染色：取海马CA1区及颞叶皮层两个部位进行统计分析：对照组大鼠偶有细胞可见NF-κB p65在核内微弱表达，单纯缺血性大鼠在慢性脑缺血后NF-κB p65在细胞核内表达明显增加，不同剂量的丁基苯酞治疗后，NF-κB p65在细胞核内的表达明显减少。各组老龄大鼠海马CA1区及颞叶皮层中NF-κB p65的表达：A组：1.45士0.34，2.32士0.46；B组：22.72士0.56，26.18士0.54，与A组相比，NF-κB p65表达明显增高，有显著性差异（P＜0.01）；C组：8.67士0.44，12.33士0.39，与B组相比，NF-κB p65表达显著减少，有显著性差异（P＜0.01）；D组：15.20士0.46，19.96士0.38；与A组、B组和C组比较，均有显著性差异（P＜0.01）；E组：11.03士0.42，14.04士0.70，E组NF-κB p65的表达介于C组与D组之间，与A组和B组比较有显著性差异（P＜0.01）。3．COX-2免疫组化染色：取海马CA1区及颞叶皮层两个部位进行统计分析：A组：1.28士0.41，2.40士0.37；B组：26.25士0.46，32.00士0.63；与A组比较，有显著性差异（P＜0.01）；C组：9.00士0.58，16.41士0.49；与A组和B组比较，均有显著性差异（P＜0.01）；D组：15.05士0.51，24.36士0.45；与A组、B组和C组比较，均有显著性差异（P＜0.01）；E组：11.24士0.70，20.23士0.52；与A组、B组、C组和D组比较，均有显著性差异（P＜0.01）；结论丁基苯酞可以减轻慢性脑缺血老龄大鼠神经元变性、坏死；丁基苯酞减少慢性脑缺血老龄大鼠脑内NF-κB p65、COX-2的表达，可能是丁基苯酞抑制炎症反应的途径之一；丁基苯酞对慢性脑缺血损伤可能有保护作用；丁基苯酞对慢性脑缺血损伤可能存在预防作用。