蚯蚓提取物抗氧化作用的研究

蚯蚓提取物抗氧化作用的研究

论文摘要

本课题基于抗氧化衰老这一社会热点,对蚯蚓提取物(extract from earthwo-rm,EE)的抗氧化作用及机理展开研究,为开发和利用蚯蚓抗氧化提取物提供科学理论依据。试验方法:(1)采用SOD、CAT、GSH-PX试剂盒提供的方法对5个不同批次的EE的主要抗氧化成分SOD、CAT、GSH-PX进行测定。(2)通过构建邻苯三酚自氧化体系、Fenton反应体系及脂蛋白PUFA过氧化体系,测定EE体外对O2-·和·OH的清除作用和对脂质过氧化的抑制作用。(3)采用不同浓度EE灌喂成年小白鼠,30天后测定其血液和肝脏抗氧化酶活性变化及MDA含量变化,检测EE对小白鼠体内的抗氧化作用。(4)通过复制氧化损伤模型,采用EE和VC对损伤部分进行治疗,测试该部位皮肤的抗氧化活性物质的变化以及用普通显微镜和扫描电镜观察试验皮肤的形态结构的变化,检测EE对皮肤氧化损伤的保护作用。(5)采用半定量RT-PCR法测定损伤皮肤组织中β-Actin、Tubulin--α、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原的基因表达量,检测蚯蚓提取物对氧化损伤皮肤中相关结构蛋白基因表达量的影响。结果表明:(1)EE中含有丰富的抗氧化酶,其中SOD含量为:898.41±42.39U/mg,CAT含量为:18.52±2.86 U/mg,GSH-PX含量为:60.03±10.75活力单位。(2) EE对体外自由基有较强的清除作用、对脂质体氧化有较强的抑制作用。(3) EE的原液和10倍稀释液能显著提高小白鼠血液及肝脏SOD,CAT,GSH-PX活性,有效降低小白鼠体内的脂质过氧化水平;20倍稀释试验组效果不明显。(4) EE对氧化损伤皮肤有较强的保护作用,各用药组的皮肤中抗氧化酶活性显著高于损伤对照组,MDA的含量也显著低于损伤对照组;病理学的切片显示,EE对于氧化损伤的皮肤具有保护作用。(5) EE能够抑制Fentons反应对细胞DNA分子的损伤,使细胞构型相关基因Tubulin-α、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原的转录活性得到一定的维持,对细胞形态与功能的维持与修复起到了基础性的作用。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 文献综述
  • 1 蚯蚓的研究状况
  • 1.1 蚯蚓的化学成分
  • 1.2 蚯蚓提取物的研究进展
  • 2 自由基与氧化损伤
  • 2.1 自由基引起氧化损伤的机制
  • 2.2 生物体内自由基的主要来源
  • 3 皮肤的氧化损伤与衰老的关系
  • 4 氧化损伤研究相关模型的建立
  • O2介导的细胞氧化模型'>4.1 HO2介导的细胞氧化模型
  • 4.2 皮肤的紫外线损伤模型
  • 4.3 皮肤组织及细胞的化学氧化模型
  • 4.4 D-半乳糖衰老模型
  • 5 抗氧化剂
  • 5.1 抗氧化剂的种类
  • 5.2 抗氧化能力的评价方法
  • 5.3 抗氧化酶类的活性测定
  • 6 研究目的与意义
  • 第二章 蚯蚓提取物抗氧化活性物质的测定及其抗氧化作用的研究
  • 1 材料
  • 1.1 试验样品与动物
  • 1.2 主要的试剂及仪器
  • 2 方法
  • 2.1 蚯蚓提取物中抗氧化活性物质的测定
  • 2.2 EE体外抗氧化试验研究
  • 2.3 EE体内抗氧化试验研究
  • 3 结果
  • 3.1 蚯蚓提取物中抗氧化活性物质的测定结果
  • 3.2 EE体外抗氧化作用结果
  • 3.3 EE体内抗氧化作用结果
  • 4 讨论与分析
  • 4.1 蚯蚓提取物中抗氧化活性物质的含量
  • 4.2 EE体外抗氧化作用
  • 4.3 EE体内抗氧化作用
  • 第三章 蚯蚓提取物对氧化损伤皮肤中抗氧化酶活性影响及病理学的研究
  • 1 材料
  • 1.1 试验样品与动物
  • 1.2 主要试剂及仪器
  • 2 方法
  • 2.1 动物分组
  • 2.2 损伤模型复制
  • 2.3 试验设计
  • 2.4 各组皮肤组织匀浆的制备
  • 2.5 测试指标及方法
  • 2.6 各组小鼠局部损伤皮肤的普通病理学观察
  • 2.7 各组小鼠局部损伤皮肤组织的扫描电镜观察
  • 3 结果
  • 3.1 小鼠氧化损伤皮肤中抗氧化酶的活性及MDA含量
  • 3.2 各组小鼠局部损伤皮肤的普通病理观察结果
  • 3.3 各组小鼠局部损伤皮肤的扫描电镜观察结果
  • 4 讨论分析
  • 4.1 小鼠氧化损伤皮肤中抗氧化酶的活性及MDA含量变化
  • 4.2 小鼠氧化损伤皮肤的病理变化
  • 第四章 蚯蚓提取物对氧化损伤皮肤中相关蛋白基因表达量的影响的研究
  • 1 材料
  • 1.1 试验样品与动物
  • 1.2 主要试剂及仪器
  • 2 方法
  • 2.1 样品处理
  • 2.2 引物的设计与合成
  • 2.3 总RNA的提取
  • 2.4 第一链cDNA合成
  • 2.5 半定量RT-PCR法测定β-Actin、Tubulin--α、Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原的基因表达量
  • 3 结果
  • 3.1 各组小鼠皮肤中β-Actin基因表达量结果
  • 3.2 各组小鼠皮肤中Tubulin-α基因表达量结果
  • 3.3 各组小鼠皮肤中Ⅰ型前胶原基因表达量结果
  • 3.4 各组小鼠皮肤中Ⅲ型前胶原基因表达量结果
  • 4 讨论与分析
  • 全文小结
  • 参考文献
  • 致谢
  • 作者简介
  • 相关论文文献

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