论文摘要
背景和目的：MicroRNAs作为小链非编码RNAs参与到各种生物学过程,参与肿瘤的发生和进展。部分肿瘤中发现miR-148b异常表达,但是它在胰腺癌中的表达和生物学效应尚不明确。方法：实时荧光定量PCR检测miR-148b在胰腺癌组织和细胞系中的表达,通过x2检验来检钡miR-148b和临床病理参数的相关性。转染miR-148b类似物以上调其在胰腺癌细胞的表达,观察miR-148b对胰腺癌细胞增殖和成瘤性的影响。通过流式细胞技术检测凋亡和细胞周期,通过transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力改变,双荧光报告基因分析验证miR-148b对AMPKα1的靶向调控作用,进一步通过实时荧光定量PCR和western blot检钡miR-148b以及AMPK α1siRNA对AMPK表达的影响。通过实时荧光定量PCR和免疫组化检测AMPK α1在胰腺癌中的表达,进一步通过沉默AMPK α1来评估AMPK α1对胰腺癌细胞增殖,凋亡,细胞周期,细胞侵袭和成瘤性的影响。结果：miR-148b在48例胰腺癌组织和5个胰腺癌细胞系中表达明显低于癌周正常胰腺组织,其表达下调与肿瘤体积,TNM分期,淋巴结侵袭和远处转移呈正相关。功能学研究显示增力miR-148b的表达能明显抑制胰腺癌细胞的增殖,诱导胰腺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞在S期。同时,miR-148b明显抑制胰腺癌细胞的侵袭和裸鼠体内成瘤。双荧光素酶报告研究显示miR-148b mimics能明显降低AMPK α1的野生型3’UTR的荧光素酶活性,降低AMPK α1在mRNA和蛋白的表达水平。同时,AMPKa1在胰腺癌组织中高表达,主要定位在癌细胞胞浆。这种高表达同miR-148b在胰腺癌中的表达呈负相关性。而下调AMPK α1明显抑制了胰腺癌细胞的增殖和成瘤,同时诱导胰腺癌细胞的凋亡,细胞周期阻滞,和侵袭抑制。这种效应同miR-148b的过表达效应相一致。结论：miR-148b通过靶向调控AMPK α1来抑制胰腺癌细胞的增殖和侵袭,在胰腺癌发生发展中发挥负性抑制作用,靶向调控miR-148b表达可能成为胰腺癌治疗的新靶点。