论文摘要
背景和目的Oct4（octamer binding factor 4）是一个在能够产生细胞种系的鼠全能性细胞中特异性表达的转录因子，对鼠胚胎发育早期阶段有特异性作用的转录因子或主要控制基因。它具有POU5F1基因编码开放阅读框架结构，含324个氨基酸，分子量18-kD，位于人染色体6p21.3。Oct4又称作POU5F1，OTF3和Oct3，是POU家族的一部分。POU转录因子作为一种DNA结合蛋白，它可以激活在启动子或增强子区域内带有顺式（cis）反应元件基因的转录，这一类基因的顺式反应元件中包含Oct结合序列（八聚体），即共有序列ATGCAAAT。作用是激活或抑制调节基因表达，维持细胞全能性。Oct4作为多能性干细胞标记物不仅在胚胎干细胞和胚胎生殖细胞中表达，而且也在胚胎和生殖肿瘤细胞中表达。目前发现有Oct4表达的胚胎和生殖细胞肿瘤有：胚胎性癌、生殖细胞瘤、睾丸原位细胞癌、成性腺细胞瘤、无性细胞瘤、精原细胞瘤、单纯性或混合性非精原细胞瘤中的胚胎性癌成分。未见各种分化类型的非精原细胞瘤中有表达。Tai等在弱致瘤性和高致瘤性人乳腺上皮干细胞、胰腺Capan-2癌细胞系和Pan-1癌细胞系、肝脏癌细胞系Mahlava、海拉癌细胞株（HeLa）、人乳腺癌细胞系—7（MCF7）中找到Oct4表达。Looijenga等从肾透明细胞癌、肺鳞癌、肺大细胞癌中找到Oct4表达。在仓鼠胰腺癌和人分化不良的甲状腺瘤中发现Oct4表达。类似胚胎、生殖细胞肿瘤，Oct4也在分化的体细胞肿瘤中表达下降。在分化培养基培养时HeLa和MCF7的Oct4表达下调。目前对体细胞肿瘤组织中Oct4的研究还很有限。除了如上所述的典型的体细胞肿瘤细胞系中证明有Oct4表达外，体细胞肿瘤中Oct4阳性表达率一般不高，并且并非所有肿瘤组织中都有表达的报道。然而，随着人们对Oct4在成体肿瘤组织中表达规律的进一步研究，Oct4与肿瘤的临床相关性，尤其是与肿瘤干细胞的相关性也许会给成体肿瘤的研究带来新的希望。膀胱癌是世界第五大常见恶性肿瘤，是泌尿生殖系肿瘤中第二位常见的导致患者死亡的原因。在我国，膀胱癌发病率居泌尿系肿瘤首位，较常见，约占所有恶性肿瘤的20％左右。近年来，膀胱癌发病率呈上升趋势，且复发率高，易产生获得性耐药。膀胱癌的发病机制和特异性肿瘤标记物尚不确定。Oct4作为全能性细胞标记物，在不少体细胞肿瘤中有表达，因此也可能在膀胱癌中表达。膀胱癌的高复发率是否和这些Oct4阳性细胞相关?另外，Oct4阳性的膀胱癌细胞是否就是肿瘤干细胞?上述疑问都是需要一一解决。膀胱癌中移行细胞癌占绝大多数，对移行细胞癌进行研究就能了解大多数膀胱癌的情况，所以，本课题研究目的包括1．探讨膀胱移行细胞癌中是否存在Oct4表达；2．探讨Oct4蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达情况和肿瘤的临床病理因素相关性。材料和方法1标本收集实验取材郑州大学第一附属医院2002—2005年部分膀胱癌病人。均是首次发病的膀胱癌病人，术前均未接受化疗和放疗。选取46例膀胱癌（男34例，女12例，年龄30～84（62.7+13.7）岁）和2例非典型增生（男性，年龄分别为48和50岁），同时取19例肿瘤边缘组织和15例正常膀胱黏膜组织进行对照检查。46例膀胱癌中44例移行细胞癌中浸润至肌层有3例，所有膀胱癌病人均无转移。根据WHO病理分级标准进行分级：膀胱移行细胞癌Ⅰ级（高分化）7例，Ⅱ级（中分化）27例，Ⅲ级（低分化）10例，腺癌1例，复合癌1例。2实验方法所有石蜡切片按照4μm切片，进行SP染色法：切片常规脱蜡至水，枸橼酸钠缓冲液微波抗原修复，3％H2O2孵育30分钟，消除内源性过氧化物酶，滴加山羊封闭血清30分钟，封闭非特异性抗原，滴加一抗Oct4，37℃孵育或4℃过夜，滴加二抗，室温或37℃孵育30分钟，然后DAB显色，固定。3评分方法阳性显色为核棕色。评分方法为，10个高倍视野下阳性细胞数百分比，阳性细胞数＞75％计3分，50％≤阳性细胞数＞75％计2分，5％≤阳性细胞数＞50％计1分，＜5％计0分；细胞染色强阳性计3分，中度阳性计2分，弱阳性计1分；阳性面积×染色强度=分数，0分：阴性，1—2分：弱阳性，3—4分：中度阳性，6—9分：强阳性。4统计学处理应用SPSS10.0统计软件对数据进行统计学分析。采用主要统计方法有X2检验和Fisher’s精确概率检验，取P＜0.05为检验水准。结果1．膀胱移行细胞癌中Oct4阳性表达率为63.6％（28／44），而在非典型增生和正常膀胱上皮组织未发现Oct4阳性表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；2．低分化的膀胱移行细胞癌Oct4阳性表达率为100％，显著高于高分化的膀胱移行细胞癌（14.3％，P＜0.05）。移行1级、2级和3级Oct4阳性表达率分别为14.3％、63％、100％，差异有统计学意义（P＜0.05）；3．低分化的膀胱移行细胞癌Oct4强阳性染色率为80％，明显高于高分化的膀胱移行细胞癌（14.3％，P＜0.05）。其中移行1级、2级和移行3级相比强阳性染色率分别为14.3％、33％、80％，移行3级和移行1级、移行2级之间的差异均有统计学意义（p＜0.05）。结论1．Oct4蛋白表达与膀胱移行细胞癌的发生相关，并且对膀胱移行细胞癌的诊断有意义。2．Oct4蛋白表达和阳性表达程度与膀胱移行细胞癌的恶性程度相关，对膀胱移行细胞癌的治疗和预后有一定的临床意义。3．Oct4蛋白在膀胱腺癌和复合癌中均有表达，提示与其发生相关，可能对膀胱腺癌和复合癌的诊断也有意义。4．Oct4阳性膀胱移行细胞癌细胞可能是肿瘤干细胞。