麦冬总皂苷酶解产物分离提取的研究

论文摘要

本文主要研究了生物酶法提取麦冬总皂苷的工艺条件,以及对麦冬总皂苷酶解产物的纯化与分离进行了研究。本文取Absida sp.O8s菌做为产酶的最佳菌种,通过对生物酶法提取麦冬总皂苷的研究,确定生物酶法提取麦冬总皂苷的最佳工艺为:5g麦冬粉末用40mL 0.02mol/LpH6.0磷酸盐缓冲液浸泡4h,加入40mL粗酶液,在温度为50℃条件下,pH6.0时经过酶反应12h后,在室温下加入3倍体积95%乙醇,在40℃或45℃静置4h,过滤,滤液蒸发至无醇味,残余液加入蒸馏水定容至100mL。酶解产物采用AB-8型大孔吸附树脂纯化。测定了 AB-8树脂的吸附容量为53.16 mg/mL,确定了洗脱剂为80%的乙醇溶液,用80%的乙醇将树脂柱中的皂苷类物质洗脱下来,收集洗脱液,与流出液合并,浓缩,干燥,回收率为85.49%。AB-8型大孔吸附树脂纯化所得麦冬总皂苷经硅胶柱分离,收集分离所得的麦冬皂苷,经HPLC检测,结果表明:以V（氯仿）:V（甲醇）的不同配比进行洗脱,洗脱出七种麦冬皂苷组分;以V（氯仿）:V（甲醇）=9.7:0.3为洗脱剂可以洗脱出标号为E的麦冬皂苷组分,经HPLC检测,标号为E的组分中主要含有麦冬皂苷C,其纯度为70.8%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 麦冬植物的自然情况、分类及药理作用
• 1.1.1 麦冬植物的自然情况
• 1.1.2 麦冬的分类
• 1.1.3 麦冬的药理作用
• 1.2 麦冬的化学成分
• 1.2.1 皂苷类
• 1.2.2 高异黄酮类
• 1.2.3 多糖类
• 1.2.4 氨基酸类
• 1.2.5 其它成分
• 1.3 关于皂苷提取的研究
• 1.3.1 中药中有效成分提取的传统方法
• 1.3.2 中药中有效成分提取的新方法
• 1.3.3 中药中甾体皂苷提取的研究进展
• 1.4 关于麦冬皂苷提取及检测方法的研究
• 1.4.1 麦冬皂苷常规提取方法的研究
• 1.4.2 麦冬皂苷生物酶法提取的研究
• 1.4.3 麦冬皂苷的检测方法的研究
• 1.4.3.1 色谱法
• 1.4.3.2 麦冬皂苷检测方法的研究进展
• 1.5 论文主要研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 菌种
• 2.1.2 培养基
• 2.1.2.1 固体斜面察氏培养基
• 2.1.2.2 液体发酵麦芽汁培养基
• 2.1.3 试剂与仪器
• 2.1.3.1 试剂
• 2.1.3.2 仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 常规醇提法与生物酶法提取麦冬总皂苷比较的研究
• 2.2.1.1 菌种的发酵培养及粗酶液制备
• 2.2.1.2 常规醇提法提取麦冬总皂苷的制备
• 2.2.1.3 生物酶法提取麦冬总皂苷的制备
• 2.2.1.4 薄层层析法（TLC）
• 2.2.1.5 待测样品溶液的制备
• 2.2.1.6 薄层层析法对待测样品的分析
• 2.2.1.7 等吸收双波长消去法
• 2.2.1.8 双波长消去法绘制标准曲线
• 2.2.1.9 麦冬总皂苷样品含量的测定
• 2.2.2 生物酶法提取麦冬总皂苷工艺条件优化的研究
• 2.2.2.1 麦冬粉末的溶涨及酶反应的底物溶液制备
• 2.2.2.2 生物酶法提取麦冬总皂苷的酶反应方法
• 2.2.2.3 生物酶法提取麦冬总皂苷的反应物料比的确定
• 2.2.2.4 生物酶法提取麦冬总皂苷的酶反应温度的确定
• 2.2.2.5 生物酶法提取麦冬总皂苷的酶反应时间的确定
• 2.2.2.6 生物酶法提取麦冬总皂苷的乙醇终止反应静置时间的确定
• 2.2.2.7 生物酶法提取麦冬总皂苷的乙醇终止反应静置温度的确定
• 2.2.3 AB-8大孔吸附树脂纯化酶法提取麦冬总皂苷
• 2.2.3.1 AB-8大孔吸附树脂的特性
• 2.2.3.2 AB-8大孔吸附树脂的预处理
• 2.2.3.3 麦冬总皂苷的大量制备
• 2.2.3.4 AB-8大孔吸附树脂吸附容量的确定
• 2.2.3.5 梯度洗脱乙醇浓度的确定
• 2.2.3.6 AB-8大孔吸附树脂纯化酶法提取麦冬总皂苷
• 2.2.4 酶法提取麦冬总皂苷的D280树脂的脱色
• 2.2.5 硅胶柱层析法分离麦冬酶解产物中的麦冬总皂苷
• 2.2.6 高效液相色谱法（HPLC）检测分析
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 生物酶法与常规醇提法提取麦冬总皂苷的比较
• 3.1.1 麦冬皂苷标准曲线的绘制
• 3.1.2 薄层层析法（TLC）对酶法与醇提法提取麦冬总皂苷的比较
• 3.1.3 双波长消去法对酶法和醇提法提取麦冬总皂苷含量的测定
• 3.2 生物酶法提取麦冬总皂苷的研究
• 3.2.1 生物酶法提取麦冬总皂苷的反应物料比的研究
• 3.2.2 生物酶法提取麦冬总皂苷的酶反应温度的研究
• 3.2.3 生物酶法提取麦冬总皂苷的酶反应时间的研究
• 3.2.4 生物酶法提取麦冬总皂苷乙醇终止反应静置时间的研究
• 3.2.5 生物酶法提取麦冬总皂苷的乙醇终止反应静置温度的研究
• 3.3 AB-8大孔吸附树脂纯化麦冬总皂苷
• 3.3.1 麦冬总皂苷的制备
• 3.3.2 麦冬总皂苷的静态吸附容量
• 3.3.3 梯度洗脱乙醇浓度的确定
• 3.3.3.1 绘制洗脱曲线
• 3.3.3.2 薄层层析（TLC）检测
• 3.4 AB-8和D280吸附树脂联用纯化酶法提取麦冬总皂苷
• 3.4.1 大孔吸附树脂纯化后的麦冬总皂苷TLC检测
• 3.4.2 大孔吸附树脂纯化后的麦冬皂苷HPLC检测
• 3.5 硅胶柱层析法纯化酶法提取麦冬总皂苷
• 3.6 硅胶柱层析纯化麦冬皂苷的HPLC检测
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢