鸭A-FABP和H-FABP基因cDNA序列克隆及其mRNA表达规律的研究

论文摘要

脂肪酸结合蛋白（fatty acid binding .proteins, FABPs）是一类分子量较小对脂肪酸有高亲和力的蛋白,在细胞内,能将其运输到脂肪酸氧化、甘油三酯或磷脂合成的部位,对脂类代谢过程有重要调控作用。本研究以家禽和哺乳动物FABP基因序列为基础,通过比较基因组学方法克隆鸭A-FABP和H-FABP基因cDNA序列;采用RT-PCR方法研究组织中A-FABP和H-FABP基因在对照组和填肥组之间mRNA表达水平差异,以及樱桃谷鸭不同生长发育时期在不同组织中的表达规律。主要结果如下:（1）填饲能显著提高樱桃谷鸭肝重、肝率、腹脂重和腹脂率（P<0.05）;填饲组中血液中胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）浓度高于对照组,但差异不显著（P>0.05）。（2）采用RT-PCR法和比较基因组法获得了鸭A-FABP和H-FABP基因cDNA序列（GeneBank Accession Number:DQ358123;DQ839646）。（3）在鸭肝脏、腿肌、脾、肺和卵巢组织中,填饲组A-FABP基因的mRNA表达量显著高于对照组（P<0.05）;在肌胃和腹脂中,A-FABP基因的mRNA的表达量显著低于对照组（P<0.05）;在其它组织中,A-FABP基因的mRNA表达量差异不显著（P>0.05）。（4）在鸭心脏、肝脏、间脑、腿肌、肺和卵巢组织中,填饲组H-FABP基因的mRNA的表达量显著高于对照组（P<0.05）;在腹脂中,填饲组H-FABP基因的mRNA表达量显著低于对照组（P<0.05）;而在其它组织中,H-FABP基因的mRNA表达量差异不显著（P>0.05）。（5）在鸭的生长发育过程中,各组织中A-FABP基因的mRNA表达规律不同。在间脑中一直没有表达;在肝脏中表达量没有显著变化（P>0.05）;在肾脏中只在23胚龄有表达;从23胚龄到56日龄,在腺胃、小肠和肺中A-FABP基因表达量有下降的趋势,而在心脏和肌胃中,A-FABP基因表达量逐渐上升。（6）在鸭的生长发育过程中,H-FABP基因在各组织中mRNA表达规律不同。从23胚龄到56日龄,在心脏和肺（不含23胚龄时的肺组织）中表达没有显著变化（P>0.05）,而在肝脏中没有表达;腺胃、小肠、间脑和腿肌中表达量有下降的趋势;在肌胃中,从23胚龄到28日龄,其表达量显著升高（P<0.05）,但到56日龄时略有下降,与28日龄相比,差异不显著（P>0.05）。（7）在鸭的生长发育过程中,A-FABP和H-FABP基因在腹脂中mRNA具有相似的表达规律。从14到42日龄,其表达量有下降的趋势,在56日龄时显著升高,显著高于14、28、42日龄的表达量（P>0.05）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 文献综述
• 1.1 脂肪酸结合蛋白家族及其研究进展
• 1.1.1 脂肪酸结合蛋白家族概述
• 1.1.2 脂肪酸结合蛋白的结构
• 1.1.3 FABPs 的配基结合特性
• 1.1.4 FABP 与脂肪酸的关系
• 1.1.5 影响动物体内FABP 浓度的主要因素
• 1.1.6 脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（A-FABP）基因的研究进展
• 1.1.7 心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）基因的研究进展
• 1.2 基因表达的研究方法
• 1.2.1 Northern 印迹
• 1.2.2 半定量RT-PCR
• 1.2.3 实时荧光定量PCR
• 1.2.4 基因芯片技术
• 1.2.5 核糖核酸酶保护试验
• 1.3 研究目的意义和主要内容
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物和取样
• 2.1.2 主要药品及试剂的配制
• 2.2 主要仪器设备
• 2.3 实验方法及步骤
• 2.3.1 引物设计与合成
• 2.3.2 DNA 片段纯化
• 2.3.3 感受态细胞的制备（CaC12 法）
• 2.3.4 PCR 产物的T 载体连接
• 2.3.5 转化
• 2.3.6 组织总RNA 的提取
• 2.3.7 反转录－－cDNA 第一链的获得
• 2.3.8 半定量RT-PCR 的反应体系
• 2.3.9 血液生化指标的测定
• 2.3.10 数据统计及分析
• 3 结果与分析
• 3.1 肉鸭填饲对屠宰性状及血浆生化指标的影响
• 3.1.1 肉鸭填饲对屠宰性状的影响
• 3.1.2 填饲对肉鸭血浆生化指标的影响
• 3.2 A-FABP 基因克隆和序列分析
• 3.2.1 RT-RCR 扩增结果
• 3.2.2 A-FABP 基因序列与其它物种的同源性比较
• 3.3 H-FABP 基因克隆和序列分析
• 3.3.1 RT-RCR 扩增结果
• 3.3.2 序列分析及同源性比较
• 3.4 A-FABP 基因mRNA 的表达规律
• 3.4.1 A-FABP 基因和GAPDH 基因PCR 扩增指数期循环数的确定
• 3.4.2 A-FABP 基因在对照组和填饲组鸭各组织的表达差异
• 3.4.3 A-FABP 基因在鸭各组织中不同时期的表达规律
• 3.5 H-FABP 基因mRNA 的表达规律
• 3.5.1 H-FABP 基因PCR 扩增指数期循环数的确定
• 3.5.2 H-FABP 基因在对照组和填饲组中各组织的表达差异
• 3.5.3 H-FABP 基因在鸭各组织中不同时期的表达规律
• 3.6 A-FABP 和H-FABP 基因在腹脂不同时期的表达规律
• 4 讨论
• 4.1 填饲对脂肪沉积和血液生化指标的影响
• 4.2 组织RNA 提取
• 4.3 半定量RT-PCR 体系的建立
• 4.4 A-FABP 和H-FABP 基因的克隆和序列分析
• 4.4.1 A-FABP 基因克隆和序列分析
• 4.4.2 H-FABP 基因克隆和序列分析
• 4.5 填饲对鸭A-FABP 和H-FABP 基因表达的影响
• 4.6 A-FABP 和H-FABP 基因在不同发育阶段的表达规律
• 5 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表学术论文目录