畅肺防喘方对哮喘大鼠气道重构和炎症介质的影响的试验研究

论文摘要

目的畅肺防喘方是课题组多年来治疗哮喘的经验方,应用于临床疗效显著,该方能有效缓解患者支气管痉挛,提高患者生活质量。其免疫作用已有初步探索。本课题拟在前期临床观察和实验研究的基础上,进一步从分子生物学和免疫学水平,研究畅肺防喘方防治哮喘的作用机制。本课题通过体外实验,运用血清药理学方法,研究该方对支气管平滑肌细胞的抑制增殖作用;并通过体内实验,观察该方对哮喘模型大鼠的平喘作用和对其支气管、肺组织形态学的影响,研究其血液、肺泡灌洗液中EOS（嗜酸性粒细胞）、IgE及相关趋化因子Eotaxin（嗜酸性粒细胞趋化蛋白）、ICAM-1（细胞间粘附分子-1）表达水平的变化。进一步从细胞和分子生物学水平探讨畅肺防喘方治疗哮喘的作用机理,从而为开发临床防治哮喘的有效中药制剂奠定基础。方法1、体内实验方法:取大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞计数和分类,对其上清液以双抗夹心酶联免疫吸附（ELISA）法进行细胞因子Eotaxin、ICAM-1含量的测定;血细胞计数分类,放免法检测血中IgE含量;制备大鼠支气管及肺组织切片,HE染色,观察气道重构情况;免疫组化法检测肺及支气管局部组织Eotaxin、ICAM-1的表达。2、体外实验方法:含药血清制备;MTT酶标法、免疫细胞化学（ICC）法测支气管平滑肌细胞的增殖水平,以了解该方对抗哮喘气道重构的作用。结果1、体内试验:1.1实验结果显示畅肺防喘方可显著降低WBC数量,尤其是嗜酸性细胞（P<0.01）,说明该方可明显改善呼吸道炎性症状。实验结果还表明血清IgE的含量降低,说明其治疗和预防作用可能是通过此途径来实现的,为畅肺防喘方治疗支气管哮喘的临床应用提供了有力的实验依据。1.2 ELISA法结果显示:与正常组比较模型组支气管肺泡灌洗液中Eotaxin、ICAM-1均显著升高,经治疗后,上述指标均显著降低。说明畅肺防喘方可显著抑制哮喘大鼠Eotaxin、ICAM-1表达。前期研究表明,该方对EOS的抑制作用较为明显。EOS浸润是哮喘炎症的显著病理生理特征,EOS向炎症部位趋化、募集,是哮喘病症中重要的病理过程,其过程机制与Eotaxin、ICAM-1等关系密切。结果提示,对Eotaxin、ICAM-1的抑制作用可能是畅肺防喘方治疗哮喘的作用机制之一。1.3肺组织病理切片HE染色显示,抗原激发后模型组肺组织嗜酸性粒细胞和炎症细胞浸润与对照组相比有明显增多（P<0.01）。2、体外实验:本实验发现畅肺防喘方高、中、小剂量组含药血清对支气管平滑肌增殖细胞核抗原（PCNA）表达的平均光密度明显高于对照组（P<0.05）,与地塞米松组无显著性差异（P>0.05）,它与MTT法观察结果一致。本次实验证明,与对照组比较,畅肺防喘方高、中剂量含药血清组能明显抑制大鼠支气管平滑肌细胞（ASMC）的增殖,与地塞米松含药血清组比较无显著性差异,而畅肺防喘方小剂量含药血清组则无明显作用,考虑可能与药物浓度有关。且随着作用时间的延长,含药血清对支气管平滑肌细胞的抑制作用有增强趋势。说明畅肺防喘方可能通过抑制组胺（His）促ASMC增殖作用而达到防治哮喘的效果,且存在一定的剂量、时间依赖关系。结论1、体内实验:证实了畅肺防喘方的平喘作用（症状改善,血中IgE、EOS,BALF中EOS含量下降,支气管及肺形态学的变化）和作用机制（抑制趋化因子Eotaxin和粘附分子ICAM-1的表达）。2、体外实验:运用血清药理学方法证实了畅肺防喘方有较好的抗哮喘大鼠气道重构的作用（抑制支气管平滑肌细胞增殖）和抑制平滑肌细胞的PCNA的作用。3、明确了宣肺平喘、清热化痰法对哮喘的防治作用机制。4、为进一步开发具有较好疗效的中药复方制剂,提供了实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 前言
• 参考文献（一）
• 实验研究
• 第一部分 体内实验
• 一、畅肺防喘方对哮喘模型大鼠外周血白细胞、嗜酸性粒细胞及血清IgE的影响
• 二、畅肺防喘方对哮喘模型大鼠支气管肺泡灌洗液中Eotaxin、ICAM-1的影响
• 三、畅肺防喘方对哮喘模型支气管及肺组织病理变化的影响
• 四、体内实验结论分析
• 参考文献（二）
• 第二部分 体外实验
• 一、不同浓度的组胺对气管平滑肌细胞增殖的影响
• 二、MTT法检测含药血清对His刺激下ASMC增殖活性的影响
• 三、畅肺防喘方不同浓度含药血清对ASMC增殖活性的影响
• 四、畅肺防喘方不同浓度含药血清对气管平滑肌细胞的增殖细胞核抗原表达的影响
• 五、体外实验结论分析
• 参考文献（三）
• 讨论
• 参考文献（四）
• 结语
• 附录
• 参考文献（五）
• 致谢
• 附图