湖羊肌肉肌内脂肪相关基因表达的发育性变化及与肌内脂肪含量的相关性研究

论文摘要

为了研究湖羊不同部位肌肉脂肪分化、沉积和代谢基因mRNA的发育性变化规律,结合屠宰试验分析这些基因mRNA表达水平对肌内脂肪沉积的影响。本研究选取初生、1、2、3、4、5、6月龄湖羊公羔各5只和成年公湖羊13只,屠宰后取背最长肌、腰大肌、后腿股二头肌和前腿肱二头肌检测其肌内脂肪含量,用荧光实时定量PCR法检测湖羊不同部位肌肉这些基因mRNA表达水平,进行了相对定量分析,并分析了与肌内脂肪含量的关系。结果显示:1)随着月龄的增加,湖羊不同肌肉部位肌内脂肪（Intramuscular Fat,IMF）含量都是呈现上升的趋势,4、5月龄是湖羊羔羊肌内脂肪迅速沉积的一个重要时期,发育到成年湖羊时肌内脂肪含量保持在相对稳定水平;同月龄背最长肌和腰大肌IMF含量显著高于股二头肌（p＜0.05）。2)随着月龄的增长,脂肪细胞分化因子PPARγ、ADD1和C/EBPα基因的发育性变化模式不同,但其共同点是表达量先上升后下降。①对于PPARγ基因来说,背最长肌PPARγ基因mRNA的表达量4月龄达最高（p＜0.01）,然后下降保持相对稳定水平,而腰大肌和后腿股二头肌PPARγ基因mRNA的表达量随着月龄的增长大体呈上升-下降-上升-下降的趋势,前腿肱二头肌PPARγ基因mRNA的表达量5月龄达最大（p＜0.01）,其余各月龄均无显著差异。②湖羊不同肌肉部位ADD1基因表达的发育性变化模式大致相似,均是到3月龄ADD1基因的表达量达最大,而后下降。不同的是背最长肌该基因的表达量随着月龄的增长并无明显差异。③湖羊不同肌肉部位C/EBPa基因表达的发育性变化模式不同,背最长肌C/EBPα基因的表达量3月龄达最大且极显著高于除4月龄以外的其它各月龄（p＜0.01）,而后回落,到成年湖羊生长阶段时降到最低;腰大肌0-5月龄该基因的表达量变化不大,各月龄间均差异不显著,6月龄上升到最高点,而成年湖羊表达量下降到最低;3月龄时C/EBPα基因在后腿股二头肌中的表达量极显著高于其它各月龄（p＜0.01）且达最大,4月龄下降,5月龄有所回升而后又下降;前腿肱二头肌该基因的表达量趋势大体为升-降-升-降,5月龄上升到最高,显著高于0、3月龄和成年湖羊（p＜0.05）,而后到成年湖羊表达量下降到最低。同月龄不同肌肉部位PPARγ、ADD1和C/EBPα基因mRNA的表达量除个别月龄有明显的差异外,其余月龄均无显著差异。湖羊背最长肌、腰大肌和后腿股二头肌PPARy、ADD1基因mRNA表达与IMF呈负相关关系,而C/EBPα基因的mRNA表达与其呈正相关。表明PPARγ、ADD1基因可能对肌内脂肪的沉积有一定的影响,C/EBPα基因可能能对肌内脂肪的沉积有促进作用。3)湖羊不同肌肉部位H-FABP基因表达的发育性变化模式不同:随着月龄的增加,背最长肌和腰大肌H-FABP基因mRNA的表达模式基本相同,2月龄达最高（p＜0.01）,总体呈现上升-下降-上升-下降的趋势,成年湖羊其表达量降到最低,而后腿股二头肌和前腿肱二头肌H-FABP基因mRNA的表达模式基本相同,都是1月龄达最高。2、3月龄H-FABP基因mRNA的表达量在湖羊不同部位肌肉表现有明显的差异,但无较明显的规律,其它月龄表达均无明显差异。湖羊背最长肌、腰大肌和后腿股二头肌H-FABP基因mRNA表达在生长期间与IMF呈正相关关系,表明H-FABP基因在湖羊肌肉中的表达可能对肌内脂肪的沉积有促进作用。4)湖羊下丘脑MC4R基因表达水平从出生到成年呈下降的趋势,但各月龄间差异不显著。湖羊不同肌肉部位MC4R基因表达的发育性变化模式不同,大体变化模式是先上升后下降,且3月龄达到最大,与其余各月龄相比差异显著（腰大肌除外）。随着月龄的增长,腰大肌MC4R基因表达无显著差异。2、3月龄MC4R基因mRNA的表达量在湖羊不同部位肌肉表现有明显的差异,但无较明显的规律,其它月龄表达均无明显差异。湖羊背最长肌、腰大肌和后腿股二头肌MC4R基因mRNA表达在生长期间与IMF呈负相关关系,表明MC4R基因在湖羊肌肉中的表达可能抑制肌内脂肪的沉积。

论文目录

• 缩略语
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 肌内脂肪沉积
• 1 肌内脂肪
• 1.1 肌内脂肪的成分
• 1.2 肌内脂肪的生成与分布
• 2 肌内脂肪与肉品质的关系
• 2.1 肌内脂肪与肉的风味
• 2.2 肌内脂肪与肉的嫩度
• 2.3 肌内脂肪与肉的pH、滴水损失及烹饪损失
• 3 脂肪细胞的分化和调控
• 3.1 对脂肪组织生理功能的新认识
• 3.2 脂肪细胞的分化
• 3.2.1 脂肪细胞分化的生化特征
• 3.2.2 脂肪细胞的分化过程
• 3.2.3 脂肪细胞分化增殖特点
• 3.3 影响肌内脂肪沉积的调控因素
• 3.3.1 营养调控
• 3.3.2 神经内分泌调控
• 3.3.3 自身调控
• 3.3.4 转录因子调控
• 第二章 肌内脂肪相关基因表达的研究进展
• 1 脂肪细胞分化重要转录因子的研究进展
• 1.1 PPARγ
• 1.2 ADD1/SREBP-1c
• 1.3 C/EBPα
• 1.4 PPARγ、ADD1和C/EBPα三者之间的关系
• 2 脂肪细胞代谢相关基因H-FABP的研究进展
• 3 脂肪细胞沉积的研究因子MC4R的研究进展
• 第二部分 试验研究
• 第三章 湖羊肌肉脂肪细胞分化重要转录因子PPARγ、ADD1和C/EBPα的表达研究
• 第一节 湖羊肌肉PPARγ基因表达的发育性变化及与IMF的相关性分析
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 肌内脂肪含量测定
• 1.4 引物设计与合成
• 1.5 RNA提取、反转录
• 1.6 PCR扩增、产物回收、克隆测序及荧光实时定量PCR反应
• 1.7 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 湖羊不同肌肉部位IMF含量的发育性变化
• 2.2 肌肉和下丘脑总RNA电泳结果
• 2.3 湖羊PPARγ和GAPDH基因RT-PCR扩增及克隆测序
• 2.4 湖羊肌肉PPARγ基因mRNA表达水平的发育性变化
• 2.5 湖羊不同肌肉组织PPARγ基因mRNA表达水平与IMF的相关性
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二节 湖羊肌肉ADD1基因表达的发育性变化及与IMF的相关性分析
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 引物设计与合成
• 1.4 real time PCR检测ADD1 mRNA丰度
• 2 结果与分析
• 2.1 湖羊ADD1和GAPDH基因RT-PCR扩增及克隆测序
• 2.2 湖羊肌肉ADD1基因mRNA表达水平的发育性变化
• 2.3 湖羊不同肌肉组织ADD1基因mRNA表达水平与IMF的相关性
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三节 湖羊肌肉C/EBPα基因表达的发育性变化及与IMF的相关性分析
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 引物设计与合成
• 1.4 real time PCR检测C/EBPα mRNA丰度
• 2 结果与分析
• 2.1 湖羊C/EBPα和GAPDH基因RT-PCR扩增及克隆测序
• 2.2 湖羊肌肉C/EBPα基因mRNA表达水平的发育性变化
• 2.3 湖羊不同肌肉组织C/EBPα基因mRNA表达水平与IMF的相关性
• 3 讨论
• 4 小结
• 本章结论
• 第四章 湖羊肌肉脂肪细胞代谢相关基因H-FABP的表达研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 引物设计与合成
• 1.4 real time PCR检测H-FABPmRNA丰度
• 2 结果与分析
• 2.1 湖羊H-FABP和GAPDH基因RT-PCR扩增及克隆测序
• 2.2 湖羊肌肉H-FABP基因mRNA表达水平的发育性变化
• 2.3 湖羊不同肌肉组织H-FABP基因mRNA表达水平与IMF的相关性
• 3 讨论
• 4 结论
• 第五章 湖羊下丘脑和肌肉脂肪细胞沉积调节因子MC4R的表达研究
• 1 材料和方法
• 1.1 试验动物
• 1.2 主要试剂和仪器
• 1.3 引物设计与合成
• 1.4 real time PCR检测MC4R mRNA丰度
• 2 结果与分析
• 2.1 湖羊MC4R和GAPDH基因RT-PCR扩增及克隆测序
• 2.2 湖羊下丘脑MC4R基因表达的发育性变化
• 2.3 湖羊肌肉MC4R基因mRNA表达水平的发育性变化
• 2.4 湖羊不同肌肉组织MC4R基因mRNA表达水平与IMF的相关性
• 3 讨论
• 4 结论
• 全文结论
• 创新点
• 参考文献
• 致谢
• 硕士期间发表论文