鸡毛松根瘤内生细菌的初步研究

论文摘要

本论文从广西十万大山海拔600米处一棵与红豆伴生上百年的鸡毛松根瘤中分离到13株内生细菌,从红豆中分离到3株内生细菌,从移栽回种植的鸡毛松小苗春季根瘤中分离到9株内生细菌,鸡毛松小苗夏季根瘤中分离到20株内生细菌。本论文分离的42株鸡毛松根瘤内生细菌和3株红豆根瘤内生细菌菌株中,有9株菌株革兰氏染色阳性。有20%的菌株能水解淀粉,20%的菌株水解明胶,87%的菌株能利用柠檬酸盐,全部菌株都能利用葡萄糖、半乳糖、已二酸、D-果糖、阿拉伯糖、蔗糖、乳糖7种碳源和精氨酸、组氨酸、天冬氨酸、磷酸氢二氨、硝酸钾5种氮源。采用16S rDNA序列分析和16S rDNA PCR-RFLP的方法确定这些菌株的分类地位。所有45株菌株共产生7种遗传图谱类型,聚类分析结果表明,在79%的相似水平上,45株未知菌株构成了7个遗传表观群。16S rDNA序列分析和聚类结果表明鸡毛松根瘤内生细菌与红豆根瘤内生细菌都表现出多样性。菌株个数组成在16S rDNA PCR-RFLP聚类和数值聚类结果基本一致。16SrDNA全序列分析表明,45株菌株属于6个属,分别为不动杆菌（Acinetobacter sp）、假单胞菌（Pseudomonas sp）、类芽孢杆菌（Paenibacillussp）、寡养单胞菌属（Stenotrophomonas sp）、芽孢杆菌（Bacillus sp）和葡萄球菌属（Staphylococcus sp）。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 综述
• 1.1 引言
• 1.2 生物固氮
• 1.2.1 豆科植物结瘤固氮研究现状
• 1.2.1.1 结瘤基因
• 1.2.1.2 固氮基因
• 1.2.1.3 基因组研究
• 1.2.2 非豆科植物结瘤固氮研究
• 1.2.2.1 非豆科双子叶树木与弗氏放线茵共生结瘤固氮系统
• 1.2.2.2 非豆科双子叶植物与根瘤茵共生结瘤固氮系统
• 1.2.2.3 裸子植物与固氮细菌共生结瘤固氮系统
• 1.2.2.4 联合固氮系统
• 1.3 植物内生细菌
• 1.3.1 植物内生细菌的定义及来源
• 1.3.2 植物内生细菌的生物学作用
• 1.3.2.1 植物内生细菌对植物的促生作用
• 1.3.2.2 内生细菌的固氮作用
• 1.4 多相分类涉及的主要实验技术
• 1.4.1 表型分群的方法
• 1.4.1.1 数值分类
• 1.4.1.2 全细胞可溶性蛋白电泳
• 1.4.1.3 多位点酶电泳
• 1.4.2 遗传型分群的方法
• 1.4.2.1 限制性片段长度多态性RFLP
• 1.4.2.2 随机扩增DNA片段的多态性分RAPD
• 1.4.2.3 DNA同源性分析和G+C mol%的测定
• 1.4.2.4 系统发育学研究方法
• 1.5 本研究的立题依据及研究意义
• 1.5.1 鸡毛松概述及其研究进展
• 1.5.2 本文研究方案和目的意义
• 第二章 鸡毛松根瘤内生细菌的生理生化研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 培养基、溶液与试剂
• 2.1.2 鸡毛松根瘤的采集地概况与分离纯化
• 2.1.3 3-酮基乳糖试验
• 2.1.4 淀粉水解试验
• 2.1.5 明胶水解实验
• 2.1.6 柠檬酸盐利用实验
• 2.1.7 氮源利用实验
• 2.1.8 碳源利用实验
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 分离纯化
• 2.2.2 3-酮基乳糖试验
• 2.2.3 淀粉水解试验
• 2.2.4 明胶水解试验
• 2.2.5 柠檬酸盐利用试验
• 2.2.6 碳源利用试验
• 2.2.7 氮源利用试验
• 2.3 讨论
• 第三章 鸡毛松根瘤内生细菌的16S rDNA PCR-RFLP分析
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 供试菌株
• 3.1.2 培养基
• 3.1.3 溶液、缓冲液和试剂
• 3.1.4 菌种的培养
• 3.1.5 总DNA的快速提取
• 3.1.6 琼脂糖凝胶电泳
• 3.1.7 16S rDNA-PCR扩增
• 3.1.8 限制性内切酶酶切
• 3.1.9 结果处理与分析方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 PCR扩增结果
• 3.2.2 16S rDNA PCR-RFLP基因图谱分析
• 3.2.3 16S rDNA的遗传关系分析
• 3.3 结果与讨论
• 第四章 鸡毛松根瘤内生细菌16S rDNA全序列测定及系统发育学分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 供试菌株
• 4.1.2 菌体的培养及总DNA提取
• 4.1.3 DNA-PCR扩增
• 4.1.4 16 4SrDNA的全序列测定
• 4.1.5 分析方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 测定结果
• 4.2.2 16S rDNA系统发育树分析
• 4.2.3 供试菌株16S rDNA全序列
• 4.3 讨论
• 第五章 总结与讨论
• 5.1 本论文的工作总结
• 5.2 本论文的工作讨论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表论文情况