斑点叉尾鮰源嗜麦芽寡养单胞菌分离、鉴定与致病机理研究

论文摘要

斑点叉尾（鱼回）作为一种优良的淡水养殖品种，我国于1984年引进，目前，已推广到30多个省市进行养殖，并在一些省市形成了产业化发展趋势。2004年以来，陆续在四川、重庆、贵州等地发生了一种严重危害斑点叉尾（鱼回）健康养殖的急性流行性传染病，该病具有发病突然，死亡率高，传染快等特点，以体表出现圆形、椭圆形或不规则的褪色斑，腹水、肠炎和后肠的肠套叠为病变特征，已给当地的斑点叉尾（鱼回）养殖带来严重的经济损失。具不完全统计，该病2004年给四川斑点叉尾（鱼回）养殖造成的经济损失在200万左右；而2005年的损失则在800万元以上，许多斑点叉尾（鱼回）养殖户因该病的发生而破产，严重挫伤了广大养殖户的养殖积极性。本试验对其病原学、病理学及致病因子的致病作用等进行了研究，其目的在于搞清该病的病原与致病机理，为养殖生产中有效地诊断和防治该病提供科学依据。 从发生斑点叉尾（鱼回）急性流行性传染病病鱼的肝、肾内分离到致病性的菌株（CCF00024），经人工感染试验证实其为斑点叉尾（鱼回）急性流行性传染病的病原菌。对该菌的形态、生理生化检测表明，其为非发酵型，严格需氧，革兰氏阴性直杆菌，极生多鞭毛，对除麦芽糖和甘露糖以外的多种糖类不利用产酸，氧化酶阴性，DNA酶、蛋白酶、脲酶、赖氨酸脱羧酶阳性，MR、VP阴性，H2S阴性。在以该菌16S rDNA序列（GenBank登录号AY970826）和GenBank内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中，分离菌CCF00024与嗜麦芽寡养单胞菌（S．maltophilia）聚在一簇，其同源性在99.4-99.6％，结合形态和生理生化特点将其鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌（S．maltophilia）。药敏实验结果表明磺胺甲噁唑、磺胺异噁唑、阿齐霉素、洛美沙星对其敏感，新霉素、卡那霉素、氨苄青霉素、头孢唑啉、先锋霉素V和链霉素等不敏感。 对斑点叉尾（鱼回）S．maltophilia自然和人工感染进行了系统的病理学研究，结果表明该菌感染斑点叉尾（鱼回）眼观病变主要表现为体表充血、出血和褪色斑，腹部膨大，腹腔内充有淡黄色或带血的腹水，胃肠道粘膜充血、出血，肠腔内充满淡黄色或含血的粘液，肠道发生套叠，甚至肠脱。病理组织学上，肾间质水肿，造血组织坏死，巨噬细胞和中性白细胞浸润，肾小管上皮细胞空泡变性和坏死；肝水肿，狄氏间隙增宽，肝细胞空泡变性及坏死；胃肠道粘膜上皮变性、坏死，脱落，固有膜，粘膜下层水肿，淋巴细胞、巨噬细胞和中性白细胞浸润；脾淤血，出血，淋巴细胞减少，大量巨噬细胞和中性白细胞浸润；骨骼肌变性、坏死，大量中性白细胞和巨噬细胞浸润。细胞病理学上，病鱼主要器官的细胞均有较为严重的损伤，细胞肿胀，超微结构破坏，特别是线粒体和细胞核的损伤很明显。线粒体表现为肿胀，嵴断裂，断裂或溶解消失，呈空囊状；细胞核

论文目录

• 第一章 引言
• 文献综述
• Ⅰ 斑点叉尾鮰疾病研究进展
• Ⅱ 嗜麦芽寡养单胞菌研究进展
• 研究目的与意义
• 第二章 斑点叉尾鮰嗜麦芽寡养单胞菌的分离与鉴定
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验鱼
• 1.1.2 主要仪器与试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 病原菌的分离
• 1.2.2 人工感染试验
• 1.2.3 病原菌的表型特征检测
• 1.2.4 病原菌16S rDNA序列测定与系统发育分析
• 2 结果
• 2.1 人工感染试验
• 2.2 病原菌的表型特征
• 2.2.1 形态特征
• 2.2.2 生理生化特征
• 2.2.3 抗药特性
• 2.4 16S rDNA序列测定与系统发育分析
• 3 讨论
• 第三章 斑点叉尾鮰嗜麦芽寡养单胞菌感染的病理形态学研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验鱼
• 1.1.2 菌株
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 饲养管理
• 1.2.2 病原菌的培养与感染
• 1.2.3 症状与病理剖解观察
• 1.2.4 组织病理学观察
• 1.2.5 细胞病理学观察
• 2 结果
• 2.1 症状与病理剖解
• 2.2 组织病理学
• 2.3 细胞病理学
• 3 讨论
• 第四章 斑点叉尾鮰嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物活性与致病性研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 主要仪器与试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 胞外产物制备
• 1.2.2 胞外产物酶活性测定
• 1.2.3 胞外产物溶血性测定
• 1.2.4 胞外产物肠毒性测定
• 1.2.5 胞外产物细胞毒性测定
• 1.2.6 胞外产物致病性
• 2 结果
• 2.1 胞外产物酶活性测定
• 2.2 胞外产物溶血性
• 2.3 胞外产物肠毒性
• 2.3.1 兔回肠结扎试验
• 2.3.2 乳鼠灌胃试验
• 2.3.3 兔和鼠肠道病理学观察
• 2.4 细胞毒性
• 2.5 致病性
• 2.5.1 小鼠致病性
• 2.5.2 斑点叉尾鮰致病性
• 3 讨论
• 第五章 斑点叉尾鮰嗜麦芽寡养单胞菌外毒素的分离、纯化与生物学活性研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 主要试剂与仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 细菌培养
• 1.2.2 毒素提纯
• 1.2.3 毒素蛋白含量测定
• 1.2.4 毒素分子量测定
• 1.2.5 毒素生物学活性测定
• 2 结果
• 2.1 蛋白浓度测定标准曲线
• 2.2 外毒素分离与提纯
• 2.3 毒素的分子量
• 2.4 外毒素的生物学特性
• 2.4.1 外毒素的溶血性与溶血价
• 2.4.2 外毒素细胞毒性
• 2.4.3 外毒素肠毒性
• 2.4.4 外毒素对小白鼠毒性
• 2.5 外毒素的免疫原性
• 3 讨论
• 第六章 斑点叉尾（?）嗜麦芽寡养单胞菌外毒素理化特性研究
• 1 材料与方法
• 1.1 主要试剂与仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 外毒素提纯
• 1.2.2 温度对毒素活性的影响
• 1 .2.3 pH对毒素活性的影响
• 1 .2.4 胰酶对毒素活性的影响
• 1 .2.5 抑制剂对外毒素活性的影响
• 1 .2.6 金属离子对外毒素的影响
• 2.结果
• 2.1 温度对毒素活性的影响
• 2.2 pH对毒素活性的影响
• 2.3 酶对毒素活性的影响
• 2.4 抑制剂对外毒素活性的影响
• 2.5 金属离子对外毒素的影响
• 3.小结与讨论
• 第七章 嗜麦芽寡养单胞菌外毒素对斑点叉尾（?）致病性的研究
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验鱼
• 1.1.2 主要试剂与仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 外毒素的分离纯化
• 1.2.2 饲养管理
• 1.2.3 试验分组与染毒
• 1.2.4 临床症状与病理剖解
• 1.2.5 组织病理学观察
• 1.2.6 细胞病理学观察
• 2 结果
• 2.1 临床症状与病理剖解
• 2.2 组织病理学
• 2.3 细胞病理学
• 2.4 血液学分析
• 3 讨论
• 第八章结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的论文
• 致谢
• 附录
• 图版