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人骨髓间充质干细胞对白血病细胞增殖和化疗敏感性的影响及其机制的研究

2020-11-23阅读(661)

人骨髓间充质干细胞对白血病细胞增殖和化疗敏感性的影响及其机制的研究

论文摘要

已有研究表明HM除调控正常造血功能外,对白血病细胞的生物学行为和化疗敏感性也有重要影响。本课题以HM的主要成分之一骨髓MSCs为主要研究对象,模拟HM对白血病细胞增殖、化疗敏感性的影响进行研究,并探索MSCs诱导白血病耐药的发生机制,以进一步明确HM与白血病耐药的关系。本研究把白血病细胞株与MSCs进行黏附共培养,发现如下结果:①U937、K562细胞增殖受抑,细胞周期进程受阻,主要阻滞于G0/G1期,并使U937细胞的自然凋亡率下降;②降低白血病细胞对DNR、Ara-C的敏感性;③采用cDNA芯片技术对细胞凋亡和细胞周期相关基因检测结果显示,黏附共培养后U937细胞出现了表达差异较大的基因,以高表达为主,包括凋亡抑制、促进基因,细胞周期正、负调控基因。其中凋亡抑制基因Bcl-XL上调最明显,可能是耐药逆转剂研究的潜在靶点;④黏附培养并未诱导U937细胞表达MDR1。本研究于国内外首次提出了MSCs调控白血病细胞增殖及诱导耐药,并采用高通量cDNA芯片技术,突破了以往有关HM调控白血病细胞的研究手段,证明MSCs调控白血病增殖和参与耐药是一个复杂的过程,在U937细胞中凋亡抑制基因Bcl-XL可能起主要作用,而经典多药耐药机制MDR1基因并未直接参与。本研究在基因水平深入探索了HM诱导白血病耐药机制,为寻找特异的耐药逆转剂奠定了理论基础。

论文目录

  • 英文缩写单词表
  • 前言
  • 第一篇 综述
  • 综述一 白血病多药耐药发生机制研究进展
  • 综述二 骨髓微环境对造血调控作用的研究进展
  • 综述三 造血微环境与血液系统恶性肿瘤耐药的研究进展
  • 第二篇 人MSCs 的培养及其与白血病细胞株黏附共培养对白血病细胞增殖的影响
  • 第一章 材料与方法
  • 第一节 实验材料
  • 一、主要试剂及来源
  • 二、实验试剂配制
  • 三、主要实验仪器
  • 四、细胞来源
  • 第二节 实验方法
  • 一、MSCs 细胞的分离
  • 二、MSCs 细胞的原代及传代培养
  • 三、MSCs 细胞免疫表型鉴定
  • 四、白血病细胞株培养
  • 五、白血病细胞与MSCs 黏附培养
  • 六、白血病细胞与MSCs 黏附率的测定
  • 七、白血病细胞增殖的检测
  • 1、血病细胞分组
  • 2、白血病细胞生长曲线的绘制
  • 3、流式细胞术测定白血病细胞周期
  • 八、统计学分析
  • 第二章 实验结果
  • 一、MSCs 生长特点
  • 二、MSCs 的免疫表型特征
  • 三、白血病细胞与MSCs 的黏附率
  • 四、白血病细胞生长曲线
  • 1. U937 细胞生长曲线
  • 2. K562 细胞生长曲线
  • 五、细胞周期的变化
  • 1. U937 细胞周期的变化
  • 2. K562 细胞周期的变化
  • 第三章 讨论
  • 第四章 结论
  • 第三篇 白血病细胞与MSCs 黏附共培养化疗敏感性变化的研究
  • 第一章 材料与方法
  • 第一节 实验材料
  • 一、主要试剂及来源
  • 二、实验试剂配制
  • 三、主要实验仪器
  • 四、细胞来源
  • 第二节 实验方法
  • 一、细胞培养
  • 二、白血病细胞生存力检测
  • 三、细胞凋亡检测
  • 1、流式细胞仪检测（Annexin V/PI 双标法）
  • （1） 原理
  • （2） 方法
  • 2、琼脂糖凝胶电泳检测DNA 片段
  • （1） 原理
  • （2） 方法
  • 四、统计学分析
  • 第二章 实验结果
  • 第一节 MSCs 对白血病细胞生存力的影响
  • 一、MSCs 对U937 细胞生存力的影响
  • 二、MSCs 对K562 细胞生存力的影响
  • 第二节 细胞凋亡
  • 一、AnnexinⅤ-FITC 凋亡检测结果
  • 二、DNA 梯度电泳结果
  • 第三章 讨论
  • 第四章 结论
  • 第四篇 MSCs 诱导U937 细胞耐药发生机制的研究
  • 第一章 材料与方法
  • 第一节 实验材料
  • 一、主要试剂及来源
  • 二、实验试剂配制
  • 三、主要实验仪器
  • 四、细胞来源
  • 第二节 实验方法
  • 一、U937 细胞与MSCs 黏附共培养
  • 二、cDNA 表达谱芯片检测
  • 1、cDNA 表达谱芯片实验原理
  • 2、总RNA 抽提
  • 3、总RNA 的纯化
  • 4、总RNA 质量检测
  • （1） 琼脂糖凝胶电泳
  • （2） Lab-on-chip 检测
  • 5、cDNA 探针制备
  • 6、芯片杂交
  • 7、数据分析
  • 三、MDR1 基因表达检测—RT-PCR
  • 第二章 实验结果
  • 第一节 实验样品质控结果
  • 一、RNA 质控结果
  • 二、芯片质控结果
  • 第二节 芯片实验结果
  • 一、芯片杂交图
  • 二、标准化处理和Ratio 分析
  • 三、数据分析结果
  • 四、cluster 分析图
  • 第三节 RT-PCR 结果
  • 第三章 讨论
  • 第四章 结论
  • 参考文献
  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 攻博期间发表的学术论文及其他成果
  • 致 谢

    • 相关论文文献

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