p53和血管抑素基因共转染抑制SGC7901细胞生长的实验研究

论文摘要

目的观察以pVITRO2质粒为载体共转染野生型p53和血管抑素基因对人胃癌细胞系SGC7901生长的影响,探讨联合基因治疗胃癌的可能性。方法用脂质体转染法将pVITRO2-p53-AS转染人胃癌细胞系SGC7901。应用RT-PCR法检测转染后细胞目的基因的表达,通过细胞集落形成试验、MTT生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期和Annexin V凋亡蛋白,观察p53和AS共转染后对SGC7901生长和凋亡的影响。采用统计软件包SPSS10.0进行统计分析。结果:1. RT-PCR结果证实p53和AS共转染后能在SGC7901细胞稳定表达。2.细胞集落形成实验显示:目的基因转染后,转染组细胞集落形成数均少于未转染组（ P<0.05 ） ;与单基因转染对照组比较,双基因共转染组明显少于单基因转染组（ P< 0. 05 ）。3、MTT细胞生长曲线图:单独转染p53、AS基因及共转染p53-AS基因的细胞生长与空载体转染细胞比较均变慢,倍增时间延长（P< 0. 05）。双基因共转染组对细胞生长抑制高于单基因转染组（P< 0. 05）。4、流式细胞仪细胞周期分析显示:比较转染p53、AS、p53-AS后的细胞,细胞周期分析均可见细胞不同程度滞留于G1 /S期。与单基因转染组相比,双基因共转染组G1/S期的比例最大（P<0.05）,提示p53-AS基因抑制SGC7901细胞生长时具有协同作用。5、流式细胞仪检测转染细胞凋亡峰和Annexin V凋亡蛋白显示:在转染p53、AS和共转染p53-AS的细胞中,,均出现不同程度的凋亡峰,凋亡率高于转染空载体组,双基因共转染组高于单基因转染组（P< 0. 05）。转染p53、AS、p53-AS组中凋亡蛋白高于转染空载体组（P< 0. 05）。双基因共转染组凋亡蛋白高于单基因转染组（P< 0. 05）。结论p53和AS基因具有协同抑制SGC7901细胞生长、共同促进细胞凋亡等作用,提示联合基因治疗恶性肿瘤优于单个基因。

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