溃结安对溃疡性结肠炎模型中iNOS的影响及相关RNAi技术研究

论文摘要

目的:1)构建大鼠溃疡性结肠炎动物模型并给予大、中、小剂量维药西帕依溃结安进行干预,检测大鼠结肠组织中iNOS mRNA及蛋白质表达的变化,从mRNA及蛋白质水平上探讨维药西帕依溃结安对iNOS表达的影响;2)建立RNAi技术平台,将已构建并筛选出的iNOS干扰载体应用基因枪技术转导入大鼠在体结肠组织,检测其抑制效率。方法:采用DNCB（2,4-二硝基氯苯）复合乙酸灌肠的方法制备大鼠溃疡性结肠炎模型,将动物分为溃疡性结肠炎模型组（22只）、生理盐水阴性对照组（21只）、5-氨基水杨酸阳性对照组（21只）、西帕依溃结安干预大剂量组（22只）、中剂量组（21只）、小剂量组（23只）,通过结肠组织标本大体评分及组织病理学改变观察西帕依溃结安的疗效;采用半定量RT-PCR及Western blot法检测各组大鼠结肠组织中iNOS mRNA及蛋白质的表达水平;同时应用基因枪将已构建并筛选出的大鼠iNOS基因的RNA干扰载体转导大鼠在体结肠组织,检测其抑制效率。结果:1)维药西帕依溃结安对大鼠溃疡性结肠炎治疗有效,大、中剂量治疗组与小剂量治疗组间疗效差异有统计学意义（P＜0.05）,而大、中剂量治疗组间的疗效差异无统计学意义（P＞0.05）;2)半定量RT-PCR结果显示大、中剂量组iNOS mRNA的表达下调,但与生理盐水阴性对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;Westernblot半定量结果显示大、中剂量治疗组iNOS蛋白质表达水平均与生理盐水阴性对照组相比明显下调,差异有统计学意义（P＜0.05）,大、中剂量治疗组与小剂量治疗组之间差异有统计学意义（P＜0.05）,而大、中剂量治疗组之间差异无统计学意义（P＞0.05）;3)应用基因枪介导的RNAi技术将有效iNOS干扰载体轰击于正常大鼠结肠组织,结果显示iNOS干扰载体剂量5μg以上时其抑制效率高,作用持续时间为9天。结论:1)维药西帕依溃结安对大鼠溃疡性结肠炎治疗有效;2)iNOS可能是维药西帕依溃结安治疗溃疡性结肠炎的作用靶点,而调节iNOS的表达发生在转录后水平上;3)在大鼠在体结肠组织中应用基因枪介导的RNAi技术,确定了iNOS干扰载体的有效浓度及作用持续时间。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 1.材判
• 1.1 实验动物及药物
• 1.2 RNA提取及RT-PCR主要试剂
• 1.3 克隆试剂与菌种
• 1.4 Western blot试剂
• 1.5 主要仪器设备
• 2.方法
• 2.1 实验流程
• 2.2 动物模型的构建
• 2.3 RNA提取及RT-PCR-
• 2.4 蛋白免疫印迹Western blot
• 2.5 数据统计处理
• 2.6 基因枪转导iNOS基因干扰载体
• 结果
• 1. 动物实验
• 2. RNA提取及RT-PCR结果
• 3. 蛋白质水平Western blot检测
• 4. 基因枪介导的活体转导实脸
• 讨论
• 小结
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 导师评阅表