蛋氨酸缺乏对雏鸡免疫器官及免疫功能影响的研究

论文摘要

本文选用1日龄艾维茵肉鸡健雏120只,随机分为两组,每组六个重复,每个重复10只鸡,其中一个重复用于全程观察,分别饲以对照组日粮（起始阶段蛋氨酸含量为0.50%；生长阶段蛋氨酸含量为0.40%）和蛋氨酸缺乏日粮（起始阶段蛋氨酸含量为0.26%；生长阶段蛋氨酸含量为0.28%）,自由饮水,饲养42天。采样时间点为14,28,42日龄。以实验病理学和流式细胞术的方法观察研究日粮蛋氨酸缺乏对雏鸡免疫器官的影响。结果如下：胸腺：蛋氨酸缺乏组胸腺组织学观察见胸腺小叶淋巴细胞显著减少,胸腺小叶结构较乱；超微结构观察见凋亡淋巴细胞增多。流式细胞仪测定,14日龄至42日龄蛋氨酸缺乏组胸腺细胞静止期（G0/G1期）显著升高,DNA合成期（S期）、DNA分裂期（G2+M期）和增值指数（PI）显著降低（P<0.01）,同时凋亡率显著高于对照组（P<0.01）。TUNEL染色观察结果与流式细胞仪检测结果一致,见较多的凋亡细胞出现。法氏囊：组织学观察见自21日龄开始法氏囊淋巴滤泡内淋巴细胞减少并伴有皮质变薄髓质变宽的现象,随日龄增加此显现更为明显。超微结构观察,淋巴细胞线粒体肿胀、嵴断裂；并见有凋亡淋巴细胞增多的现象。流式细胞结果显示,28日龄和42日龄时蛋氨酸缺乏组法氏囊淋巴细胞Go／G1期显著升高,S期、G2+M期和增殖指数（PI）显著降低（P<0.01）,同时法氏囊淋巴细胞凋亡率显著高于对照组（P＜0.01）。TUNEL染色观察结果与流式细胞仪检测结果一致,见较多的凋亡细胞出现。脾脏：蛋氨酸缺乏组脾脏红髓和白髓淋巴细胞明显减少,组织学结构紊乱；超微结构观察可见凋亡细胞增多,线粒体肿胀或形成空泡,脊断裂甚至消失。流式细胞术分析结果显示,Go／G1淋巴细胞比例显著升高,而S期、分裂G2M期淋巴细胞比例以及PI显著降低。TUNEL染色观察结果与流式细胞仪检测结果一致,见较多的凋亡细胞出现。脾脏超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性显著降低,谷胱甘肽（GSH）含量显著降低,丙二醛（MDA）含量显著升高（P<0.01）,抑制羟自由基能力下降。与对照组比较,蛋氨酸缺乏组雏鸡血清SOD、GSH-Px活性显著降低,GSH含量显著降低,MDA含量显著升高（P<0.01）,抑制羟自由基能力显著降低（P<0.05或P<0.01）；外周血T淋巴细胞亚群检测发现,蛋氨酸缺乏组雏鸡外周血CD3+T细胞、CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞百分率不同程度地下降,CD4+/CD8+降低；外周血T淋巴细胞增值指数降低；IL-2含量显著降低（P<0.01）；血清免疫球蛋白IgG、IgA和IgM含量极显著低于对照组（P<0.01）。研究结果表明：①雏鸡日粮蛋氨酸缺乏时,外周血T淋巴细胞亚群比例受到影响,CD4+和CD8+T淋巴细胞比例显著减少,干扰了成熟T淋巴细胞生物学功能的发挥,进而对细胞免疫功能产生抑制作用。②另外血清免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）含量减少表明B淋巴细胞的功能也受到一定程度的影响,也就干扰了体液免疫功能的正常发挥。③脾脏抗氧化酶GSH-Px)活性下降,GSH含量显著降低,脂质过氧产物丙二醛（MDA）含量显著升高以及抑制羟自由基能力下降,导致脾脏发生氧化损伤。④蛋氨酸缺乏亦可引起雏鸡胸腺、法氏囊及脾脏淋巴细胞增殖分化受阻,凋亡细胞增多,是进一步导致免疫器官生长发育受阻的病理学基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 前言
• 1.1 蛋氨酸在动物体内的吸收、代谢、分布
• 1.1.1 吸收
• 1.1.2 代谢途径
• 1.1.3 分布
• 1.2 蛋氨酸的生物学功能
• 1.2.1 促生长作用
• 1.2.2 解毒作用
• 1.2.3 抗肿瘤与抗癌作用
• 1.2.4 参与甲基的转移
• 1.2.5 直接用于蛋白质的合成
• 1.2.6 其它作用
• 1.3 蛋氨酸缺乏
• 1.3.1 蛋氨酸需要量
• 1.3.2 临床症状
• 1.3.3 病理变化
• 1.3.4 血液和组织生化指标的变化
• 1.4 蛋氨酸毒性作用
• 1.5 蛋氨酸与免疫
• 1.5.1 蛋氨酸对免疫器官生长发育的影响
• 1.5.2 蛋氨酸对非特异性免疫功能的影响
• 1.5.3 蛋氨酸对体液免疫的影响
• 1.5.4 蛋氨酸对细胞免疫的影响
• 1.5.5 蛋氨酸对细胞因子的影响
• 2 研究目的及意义
• 3 材料与方法
• 3.1 试验材料
• 3.1.1 试验动物及日粮
• 3.1.2 主要试剂和仪器
• 3.2 试验方法
• 3.2.1 动物分组及饲养管理
• 3.2.2 临床观察
• 3.2.3 病理学观察
• 3.2.4 免疫器官绝对重量及脏器指数
• 3.2.5 免疫器官淋巴细胞生长周期检测
• 3.2.6 免疫器官淋巴细胞凋亡检测
• 3.2.7 外周血T淋巴细胞亚群检测
• 3.2.8 外周血淋巴细胞增殖功能
• 3.2.9 生化指标检测
• 3.3 数据统计与分析
• 4 结果
• 4.1 临床观察
• 4.2 免疫器官绝对重量及脏器指数
• 4.2.1 胸腺
• 4.2.2 法氏囊
• 4.2.3 脾脏
• 4.3 病理学观察
• 4.3.1 剖检变化
• 4.3.2 组织学变化
• 4.3.3 超微结构变化
• 4.4 免疫器官淋巴细胞生长周期变化
• 4.4.1 胸腺细胞周期的变化
• 4.4.2 法氏囊细胞周期的变化
• 4.4.3 脾脏细胞周期的变化
• 4.5 免疫器官细胞凋亡百分率变化
• 4.5.1 胸腺细胞凋亡百分率变化
• 4.5.2 法氏囊细胞凋亡百分率变化
• 4.5.3 脾脏细胞凋亡百分率变化
• 4.6 外周血T淋巴细胞亚群检测
• 4.7 外周血淋巴细胞增殖功能变化
• 4.8 生化指标检测
• 4.8.1 血清和脾脏总SOD活性变化
• 4.8.2 血清和脾脏GSH-Px活性变化
• 4.8.3 血清和脾脏GSH含量变化
• 4.8.4 血清和脾脏MDA活性变化
• 4.8.5 血清和脾脏抑制羟自由基能力变化
• 4.8.6 血清IL-2含量变化
• 4.8.7 血清IG含量变化
• 5 讨论
• 5.1 临床症状
• 5.2 蛋氨酸缺乏对雏鸡免疫器官的影响
• 5.2.1 蛋氨酸缺乏对雏鸡胸腺的影响
• 5.2.2 蛋氨酸缺乏对雏鸡法氏囊的影响
• 5.2.3 蛋氨酸缺乏对雏鸡脾脏的影响
• 6 结论与创新
• 参考文献
• 图版及说明
• 致谢