温州地区食品中五种主要致病菌的调查分析

论文摘要

目的：食品安全是一个越来越引起人们重视的问题,不仅影响到人们的生活、工作和健康,更是关系到国计民生的大事。在各种食物中毒事件中,细菌性食物中毒是主要因素。常见的食源性致病菌包括沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌及肠毒素A、B、C、D、E、G、H、I、J九种类型、单核细胞增生李斯特菌、致病性大肠杆菌O157：H7等。本文针对我国食物中毒最常见的五种食源性致病菌进行监测,了解温州市食品中食源性致病菌的污染状况,初步确定可能污染五种致病菌的高危食品的种类,为食物中毒监测和食品安全的危险性评估提供科学依据。方法：参照国家相关病原菌检验标准（GB/T4789.4、6、7、10、30-2003）的基础上进行适当的改良,主要是加入科玛嘉显色培养基的应用,对食品样品进行沙门氏菌、致病性大肠杆菌O157：H7、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特菌的分离、生化鉴定。金黄色葡萄球菌肠毒素检测主要利用以下两种方法：（1）利用普通PCR进行肠毒素A、B、C、D、E、G、H、I、J等9种类型进行检测。（2）利用小型全自动荧光免疫分析仪（mini VIDAS）进行金黄色葡萄球菌肠毒素SEA、SEB、SEC、SED和SEE等5种类型的检测。利用多重PCR检测副溶血弧菌的溶血毒素（TDH、TRH、TLH）。沙门菌菌株通过血清进行血清学分型。结果：2005-2008年5月和10月在我市开展食品污染监测工作,共对生肉类（牛、羊、鸡、猪）、水产品、熟肉制品、冷菜、生食蔬菜、米面食品、生牛奶和鲜榨汁等8类食品中沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌0157：H7、单核细胞增生性李斯特菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌进行监测,共检测914份样品,检出各类致病菌215株,总检出率（以样品计）为23.19%（其中有3份是在同一样品中分别检出2种致病菌）,其中5月和10月的总检出率分别为22.75%和23.58%。在755份样品中副溶血性弧菌检出106株,检出率为14.04%,水产品中副溶血性弧菌污染最严重,检出率为19.58%,与其它各类食品之间比较显示出统计学差异性（X2=20.496,P<0.01）；在591份样品中沙门氏菌检出27株,检出率为4.57%,生肉类中沙门氏菌污染最严重,检出率为12.87%,与其它类食品之间比较显示出统计学差异性（X2=48.66,P<0.01）；在540份样品中单核细胞增生李斯特菌检出20株,检出率为3.52%,生肉类中单核细胞增生性李斯特菌污染最严重,检出率为5.5%,但与其它类食品之间比较,未显示出统计学差异性（X2=7.719,P>0.05）；在281份样品中金黄色葡萄球菌检出62株,检出率为22.06%,除了水产品外其他各类食品中金黄色葡萄球菌污染都比较严重。在455份样品中均未检出肠出血性大肠杆菌O157：H7。从农贸市场、餐饮店（饭滩、酒店等）和超市采集各类样品的致病菌检出率之间显示出统计学差异（X2=9.153,P<0.01）。沙门氏菌监测结果,经血清型鉴定,共分离出6个血清型,1株未能最终确定其血清型。血清型最多是德尔卑沙门菌,其次鼠伤寒沙门菌和阿贡钠沙门菌。62株金黄色葡萄球菌,经VIDAS鉴定,26株携带传统毒素,携带肠毒素率为41.94%,2008年携带肠毒素率在四年中最高,为62.5%。经PCR鉴定,62株金黄色葡萄球菌检测到SEA-SEJ基因的有40株,携带肠毒素基因率为64.51%,同时携带2种及以上毒素基因的菌株有28株,占45.16%,而携带传统肠毒素基因（SEA-SEE）的22株,占35.48%；其中携带SEG毒素基因的最多,有22株,占35.48%。两种方法检测传统肠毒素阳性的检出率不相同,它们之间显示出统计学差异（X2=9.647,P<0.01）。副溶血弧菌检测结果显示：携带TDH占57%,携带TRH占10.75%,携带TDH和TRH占7.53%,携带TDH毒素占主要趋势。结论：温州市食品中食源性致病菌的污染严重,主要是金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌的污染,应引起食品卫生管理部门的高度重视；；食品中食源性致病菌总检出率最高为10月份与温州地区发生的食物中毒相吻合；温州地区食品的致病菌污染在农贸市场、餐饮店（饭滩、酒店等）和超市的销售场所的地区分布存在差异性应该重点加强超市和农贸市场食品的监测力度,防止食源性疾病的发生；金黄色葡萄球菌肠毒素类型众多,携带各类肠毒素基因的金黄色葡萄球菌广泛存在,特别是利用PCR方法扩大了金黄色葡萄球菌肠毒素不同型别的调查,经分析携带SEG、SEH、SEI、SEJ毒素基因的比例比较高,提示要加强预防非传统金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒事件,,因此不同型别的肠毒素基因在金黄色葡萄球菌中的分布状况的研究应该受到足够重视；食品污染物中副溶血弧菌携带毒素,与温州地区食物中毒中副溶血弧菌引起的情况有必然的联系,应该加强食品污染物的监测力度,预防和控制食源性疾病的发生和发展.

论文目录

• 致谢
• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语
• 附表清单
• 目次
• 1 引言
• 1.1 食品安全及食源性致病菌
• 1.1.1 食品安全（FOOD SAFETY）
• 1.1.2 食源性致病菌的危害
• 1.2 本课题涉及的五种食品致病菌
• 1.2.1 沙门氏菌属（SALMONELLA SPP）
• 1.2.2 单核细胞增生李斯特氏菌
• 1.2.3 金黄色葡萄球菌
• 1.2.4 出血性大肠埃希菌EHEC 0157:H7
• 1.2.5 副溶血性弧菌
• 1.3 食源性致病菌的相关检测方法
• 1.3.1 微生物专用酶快速反应系统的检测技术
• 1.3.2 以免疫学方法建立的快速检测技术
• 1.3.3 自动化系统仪器检测
• 1.3.4 聚合酶链反应（POLYMERASE CHAIN REAETION,PCR）技术
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要试剂及试剂盒
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 标准菌种
• 2.1.4 仪器设备
• 2.1.5 样品的种类及来源
• 2.1.6 采集样品要求和注意
• 2.1.7 检测项目
• 2.2 检验方法
• 2.2.1 样品前处理
• 2.2.2 食品中沙门氏菌检验
• 2.2.3 食品中EHEC O157:H7检验
• 2.2.4 食品中单增李斯特菌检验
• 2.2.5 食品中金黄色葡萄球菌检验
• 2.2.6 食品中副溶血性弧菌检验
• 2.2.7 菌株肠毒素检测
• 2.2.7.1 金黄色葡萄球菌肠毒素
• 2.2.7.2 副溶血性弧菌肠毒素
• 2.3 实验质量控制
• 3 结果
• 3.1 2005-2008年四年食品总监测结果的分析
• 3.1.1 四年各种食源性致病菌在各类食品中的检出情况
• 3.1.2 四年8类食品中五种食源性致病菌的检出率
• 3.1.3 四年8类食品中五种食源性致病菌在5月和10月的检出率
• 3.1.4 2005-2008年不同来源样品五种致病菌的检出率
• 3.2 分离的沙门菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌相关研究结果
• 3.2.1 2005-2008年四年分离沙门菌血清分型分布的情况
• 3.2.2 2005-2008年金黄色葡萄球菌肠毒素检测结果的分析
• 3.3 2005-2008年副溶血性弧菌肠毒素结果的分析
• 4 讨论
• 参考文献
• 综述
• 作者简历及在学期间所所取得的科研成果