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甘蓝型油菜新型不育系mtDNA的RAPD分析

2020-11-22阅读(467)

甘蓝型油菜新型不育系mtDNA的RAPD分析

论文摘要

本研究采用RAPD 标记技术对7 份甘蓝型油菜细胞质雄性不育材料和3 份保持材料mtDNA进行了多态性分析和聚类比较,以确定这7 份不育材料分类地位,研究结果如下: 1 实验材料的聚类分析结果: 由mtDNA 的RAPD 分析的聚类结果,可将10 份实验材料在遗传距离为0.1186处聚为5 组: Ⅰ:Pol 2A、Pol 3A、Pol 1A; Ⅱ:L04-02A、L04-05A、L04-01A; Ⅲ:L04-01B、Pol3B; Ⅳ:L04-04B; Ⅴ:0053A。从聚类分析结果可以看出,胞质来源相同或形态相似的材料聚在一起,第Ⅰ组由来源于Pol CMS 的3 份不育系构成;第Ⅱ组由来源于Cooktail、Synery和PF 的不育株育成的不育系构成,它们都属于大花瓣、无粉型;第Ⅲ组和第Ⅳ组为保持系;第Ⅴ组为Ogu CMS。实验表明第Ⅱ组材料L04-02A、L04-05A、L04-01A为同一类型的细胞质雄性不育系,它们与Pol CMS 和Ogu CMS 有很大的差异,是一种新型甘蓝型油菜不育系。该组不育材料有一条大小为S146?650bp 的条带,可将该组材料和其它不育系细胞质区分开来。2 mtDNA的RAPD分析结果: 利用23 条具有较好多态性的引物以及优化的RAPD体系进行实验材料的RAPD分析,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,均得到了清晰的DNA扩增图谱,且重复性较好。扩增共获得132 条清晰的多态性带,每个引物扩增出39 条带,平均6 条带。3 线粒体DNA 的提取与纯化方法研究: 1)离心力研究表明,分离线粒体时,分离细胞破碎组织时的离心力、线粒体分离时的离心力、线粒体纯化时的离心力分别为1000g、20000g、18000g时,线粒体产量高,而且从中提取到了丰富的mtDNA; 2)实验表明,提取mtDNA 过程中,用新鲜材料提取的mtDNA 纯度高无降解,而冻样则有降解现象,所以mtDNA提取最好使用新鲜材料; 3)缓冲液C 的用量表明,一般25ml30ml 蔗糖衬垫液C 中可加入约10g新鲜叶片中所得到的线粒体,这样分离到的线粒体比较纯,进一步可获得纯的mtDNA;

论文目录

  • 摘要
  • SUMMARY
  • 缩略词语表（Abbreviation）
  • 第一章 文献综述
  • 1 油菜的经济价值与生产现状
  • 2 油菜的起源及其分布
  • 3 植物雄性不育
  • 4 植物叶绿体和线粒体与细胞质雄性不育
  • 5 CMS 形成的分子机制
  • 6 植物细胞质雄性不育系分类方法
  • 7 油菜细胞质雄性不育的类型
  • 8 本研究的目的意义
  • 9 技术路线
  • 第二章 材料与方法
  • 1 实验材料
  • 2 实验方法
  • 2.1 所需试剂及缓冲液的配制
  • 2.2 所用主要设备的规格及产地
  • 2.3 油菜叶片mtDNA 的提取与纯化
  • 2.4 mt DNA的纯度及浓度测定
  • 2.5 RAPD标记稳定性探索实验
  • 2.6 PCR 反应体系
  • 2.7 扩增条件探索
  • 2.8 引物筛选
  • 2.9 扩增产物检测
  • 3 数据分析
  • 第三章 结果与分析
  • 1 mtDNA提取和纯化质量的分析
  • 1.1 材料的培养方法
  • 1.2 材料的用量
  • 1.3 离心力对线粒体分离的影响
  • 1.4 缓冲液A 的成份与缓冲液C 的用量对mtDNA提取的影响
  • 2 紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测结果
  • 3 影响RAPD稳定性的主要因子
  • 3.1 模板量对稳定性的影响
  • 2+浓度对RAPD 扩增的影响'>3.2 Mg2+浓度对RAPD 扩增的影响
  • 3.3 TaqDNA 聚合酶浓度对稳定性的影响
  • 3.4 dNTPs 对稳定性的影响
  • 3.5 引物量对稳定性的影响
  • 3.6 PCR 反应体系
  • 3.7 扩增条件探索
  • 3.8 RAPD条件优化的结果
  • 4 mtDNA的RAPD 分析
  • 4.1 引物的筛选
  • 4.2 mtDNA的RAPD 分析
  • 5 聚类分析
  • 第四章 结论
  • 1 聚类分析结果
  • 2 RAPD技术在本试验中的可行性分析
  • 3 mtDNA提取与纯化
  • 4 最佳RAPD条件
  • 第五章 讨论
  • 1 改良蔗糖衬垫法提取mtDNA的效应分析
  • 2 引物的筛选
  • 3 RAPD结果的稳定性
  • 4 RAPD在油菜CMS 分类研究中的应用
  • 5 油菜中RAPD扩增时容易出现的问题及其解决方法
  • 致谢
  • 参考文献
  • 个人简介
  • 导师简介
  • 独创性声明

    • 相关论文文献

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