重组多头绒泡菌肌球蛋白Ⅱ（Myosin Ⅱ）的表达及其酶活性的测定

论文摘要

菌类是用于研究细胞运动的重要手段之一。多头绒泡菌原质团胞质流动旺盛,这种运动的能量来自于肌球蛋白 II（myosin II）与肌动蛋白（actin）的相互作用。与动物的肌肉和非肌肉细胞中 Ca2+的激动调节作用不同,多头绒泡菌中这种相互作用不被 Ca2+所激动。一个引起人们注意的现象,即多头绒泡菌和扇贝的 myosinII 皆与 Ca2+结合,且两者的亚单位组成相似,然而,Ca2+对多头绒泡菌 myosin II活性起抑制作用,而对扇贝 myosin II 活性起激动作用。为揭示何种亚单位决定了Ca2+对 myosin II 活性起抑制或激活作用,本研究采用构建重组蛋白的方法研究多头绒泡菌肌球蛋白和扇贝肌球蛋白的结构,功能和调节模式;并已成功构建出多头绒泡菌肌球蛋白重链、轻链、重酶解肌球蛋白（heavy meromyosin,HMM）和扇贝轻链的病毒载体,而且已在昆虫细胞（sf-9）中成功表达了重组多头绒泡菌HMM。初步研究发现 HMM 的运动性（motility）随着 Ca2+浓度的增加而逐渐变慢,但其酶活性没有受到 Ca2+的抑制,说明 myosin 的尾部轻酶解肌球蛋白（lightmeromyosin,LMM）可能对 Ca2+的敏感性有一定的调节作用。为了进一步研究重组多头绒泡菌 myosin II 的特性以及 LMM 对 Ca2+的敏感性和酶活性的影响,本实验在 sf-9 细胞中表达重组多头绒泡菌 myosin II,并对其 Mg2+-ATPase 活性做了初步研究,主要结果如下: 1.重组多头绒泡菌肌球蛋白II（RecombinantMyosinIIofPhysarumpolycephalum,RMPP）的成功表达 携带有重组多头绒泡菌重链（heavy chain, HC）,磷酸化轻链（phosphorylated lightchain, PLC）,钙结合轻链（Ca2+-binding light chain,CaLC）的重组杆状病毒载体共同转染 sf-9 细胞,并在其中共表达。培养 3 天后,提取,纯化,得到重组的多头绒泡菌 Myosin II。

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 实验材料、仪器设备和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢
• 四、英文缩略语表