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清气凉营法抗流感实验研究与流感病毒HA、NA基因变异分析

2020-11-23阅读(727)

清气凉营法抗流感实验研究与流感病毒HA、NA基因变异分析

论文摘要

流感是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。流感病毒分为甲、乙、丙三型,禽流感病毒属于甲型流感病毒。甲型流感病毒宿主广泛、毒力强、经常发生基因变异,对人类健康危害最大。甲型流感病毒根据其包膜糖蛋白血凝素和神经氨酸酶分为不同亚型,目前已发现16种HA和9种NA亚型。历史上在人类引起大流行的是H1,H2,H3亚型,但是,近年来不断有禽流感病毒感染人类的报道,主要是H5、H7、H9亚型,尤其是H5亚型禽流感,自从2003年开始爆发于亚洲以来,已经蔓延到亚洲、欧洲、非洲许多国家,截至2006年5月,已有208人确诊感染,其中115例死亡,死亡率大于50%,对人类健康构成极大威胁。 对流感的治疗没有特效药物,目前控制流感流行的方法只有接种疫苗。每年在流感流行季节前在流感的高危人群中进行预防接种是减轻流感危害的重要措施。疫苗接种不仅可以降低高危人群的发病率和死亡率,也可减轻症状,降低并发症的发生,降低继续传播的几率。疫苗保护效果的差异主要取决于制备疫苗的流感毒株的抗原性与实际流行株抗原性的匹配程度。 流感好发于每年11月至次年2月,属于“伏气温病”、“春温”范畴。春温为感受了冬令寒邪,潜伏体内,郁久化热,至春伏热外发,伏邪自发于气分或营分。流感大流行期间,患者主要症状有发热,咽喉痛、咳嗽、肌痛,全身乏力、头痛、寒战、汗出、神昏谵语等。发病急骤,病情凶险,甚至数日内死亡。这些特征性表现根据春温辨证,属于伏邪发于气分、营分证,其辨证可循春温热烁营阴证。叶天士云:“入营尤可透热转气”,营分证的治疗原则为清营泄热,透热转气,代表方为清营汤。 一、研究目的 1、根据温病学伏气温病理论,确立清气凉营法治疗流感,体内外实验证实清营汤的抗病毒作用。 2、清营汤抗流感作用机制的初步探讨。 3、流感病毒A/Fort Monmouth/1/47（H1N1）HA、NA基因克隆、变异序列分析,找出变异位点,分析与流感病毒相关亚型的同源性。 二、实验步骤 1、流感病毒A/Fort Monmouth/1/47（H1N1）鸡胚尿囊腔传代、鼠肺适应,血凝滴度测定。 2、清营汤体内外抗流感病毒实验。 3、清营汤对流感小鼠血清SOD、MDA变化的影响。 4、尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR扩增病毒HA、NA基因序列,克隆测序并分

论文目录

  • 中文摘要
  • 引言
  • 第一章 文献研究
  • 第一节 流感病毒的基本特点
  • 1、流感病毒的基本特征
  • 2、流感病毒的基因组特点
  • 3、流感病毒基因组转录与复制
  • 4、流感病毒的理化性质
  • 5、流感的传播方式
  • 6、培养特性
  • 第二节 流感的发病机理研究进展
  • 1、发热与细胞因子的关系
  • 2、呼吸道症状
  • 3、细胞病变效应
  • 4、免疫反应
  • 5、流感病毒感染与自由基损伤
  • 第三节 流感大流行的回顾
  • 1. 20世纪流感的大流行
  • 2. 禽流感病毒威胁人类健康
  • 3. 人H5N1感染病例临床、流行病学、实验室、X线特征
  • 第四节 流感大流行的特点与防治
  • 1. 流感发病与临床表现
  • 2. 流感病毒的流行特点
  • 3、常见的并发症
  • 4. 抗病毒药物
  • 5. 疫苗
  • 第五节 清气凉营法抗流感的思路
  • 1、中医药治疗流感的研究进展
  • 2、伏气温病学说的发展历程
  • 3、流感的辨证分析
  • 第二章 实验研究
  • 第一节 流感病毒鼠肺适应株制备、毒力测定
  • 1. 实验材料
  • 2. 实验方法
  • 50)'>3. 小鼠体内病毒滴度测定(LD50)
  • 4. MDCK（狗肾细胞）病毒滴度测定
  • 5. 血凝滴度测定
  • 第二节 清营汤对流感病毒所致小鼠肺炎抑制作用
  • 1. 实验目的
  • 2. 实验材料
  • 3. 实验方法
  • 4. 统计学处理
  • 5. 实验结果
  • 6. 结论
  • 7. 讨论
  • 第三节 清营汤对小鼠流感肺炎的死亡保护作用
  • 1. 实验材料
  • 2. 实验方法
  • 3. 观察
  • 4. 计算与统计学处理
  • 5. 实验结果
  • 6. 结论
  • 第四节 清营汤对流感小鼠血清SOD、MDA变化的影响
  • 1、实验目的
  • 2、实验材料
  • 3. 结果
  • 4. 结论
  • 5. 讨论
  • 第五节 清营汤体外抑制流感病毒实验
  • 1. 实验目的
  • 2. 实验材料
  • 3. 实验方法
  • 4. 结果
  • 5、结论
  • 6、讨论
  • 第六节 流感病毒NA基因克隆及序列分析
  • 1、实验目的
  • 2、实验材料
  • 3、实验方法步骤
  • 4、结果与分析
  • 5、小结与讨论
  • 第七节 流感病毒HA基因克隆及序列分析
  • 1、实验目的
  • 2、实验材料
  • 3、实验方法步骤
  • 4、结果与分析
  • 5、小结与讨论
  • 讨论
  • 1、实验结果分析
  • 2、结论
  • 3、创新之处
  • 结语
  • 参考文献
  • 附录
  • 1、缩略词（abbreviations）
  • 2、流感小鼠病理图片
  • 3、提交genbank HA和NA基因序列
  • 4、HA和NA进化树
  • 5、在读期间发表论文
  • 致谢

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