儿童表皮葡萄球菌脑膜炎脑脊液蛋白质组学的初步研究

论文摘要

目的拟通过建立正常中国儿童CSF蛋白质双向凝胶电泳图谱,筛选表皮葡萄球菌脑膜炎（Staphylococcus epidermidis meningitis,SeM）特异性蛋白质,为SeM的早期诊断提供线索,同时也为进一步治疗提供参考。方法收集SeM患儿和同年龄正常儿童CSF各4ml,三氯乙酸（trichloracetic acid,TCA）沉淀法获取CSF总蛋白质,固相pH梯度（immobile pH gradient,IPG）二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（2-DE）技术分离蛋白质,染色后,对凝胶进行扫描获取图像,利用图像分析软件进行比较分析,寻找两组患儿CSF蛋白质谱的异常变化斑点。筛选出5个显著差异表达的蛋白质斑点,切取后进行基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱（Matrix-assisted laser desorption/ionization time offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）分析,获得肽质量指纹图谱（Peptide mass fingerprinting,PMF）,运用生物信息学技术获取蛋白的基本信息,确定差异蛋白质。结果正常儿童CSF分离获得蛋白质斑点438个,SeM患儿CSF分离获得蛋白质斑点425个,其中发现有25个蛋白质点仅在正常CSF表达,在SeM CSF中表达而在正常CSF中无表达的蛋白质点为12个;与正常CSF蛋白质点表达量比较,SeM有6个蛋白质点表达量有2倍以上上调,而19个蛋白质点表达量有2倍以上下调。共选出5个差异比较明显的蛋白质点进行MALDI-TOF-MS分析,获得了5张肽质量指纹图谱。软件识别其有效肽片断峰后查询数据库,搜索后匹配到蛋白质的点有5个。发现高亲和力的谷氨酸运载体和α2-HS糖蛋白仅在SeM CSF中表达,HP蛋白在SeM CSF中表达量上调,载脂蛋白E和激肽释放酶6在SeM CSF中表达量下调。可能成为SeM的特异性蛋白质分子。结论本实验成功建立了正常儿童和SeM患儿CSF的双向凝胶电泳图谱。通过凝胶图像分析和计算机信息处理,两者比较发现有蛋白质点存在着量或质的差别。其中高亲和力的谷氨酸运载体、α2-HS糖蛋白、HP蛋白、载脂蛋白E和激肽释放酶6可能与SeM发生发展相关,为早期诊断及寻找新的药物靶点提供了新的思路。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 目录
• 英文缩略语简表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 结果
• 3.1 SeM CSF 2-DE图谱与正常儿童CSF比较
• 3.2 正常CSF与SeM CSF差异蛋白质点
• 3.3 部分差异蛋白质点的质谱鉴定结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 第六章 参考文献
• 第七章 综述
• 致谢