番荔枝内酯单体（desacetyluvaricin）对HepG2.2.15细胞株细胞凋亡、NF-kB/p65表达的影响

论文摘要

目的:通过HBx促进肝癌的发生及DES对其影响的研究,探讨DES干预乙型肝炎进展为肝癌的机理,即是否通过抑制HBxAg诱导的核转录因子NF-kB/p65的高表达。方法:HepG2.2.15和HepG2细胞株分别以3种不同浓度（1×104/ml、3×104/ml、10×101/ml）接种于3块24孔板中,细胞计数法确定最佳接种浓度和加药时间。DES用DMEM完全培养基溶解,分为3个浓度（100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）,以DDP（20μg/ml）为对照,MTT法检测DES对HepG2.2.15和HepG2细胞株是否具有抑制作用,如果有作用,绘制细胞的生长曲线,明确药物工作浓度和时间。在该药物工作浓度和时间下,实验分为6组:HepG2.2.15细胞株DES组、DDP组、正常对照组,HepG2细胞株DES组、DDP组、正常对照组,细胞免疫荧光法检测HepG2.2.15细胞株HBx蛋白的表达强度;收集各组细胞,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡的表达;抽提各组核蛋白,ELISA法定量检测NF-kB/p65的活性。结果:HepG2.2.15和HepG2细胞株均以3×101/ml为最佳接种浓度,接种后48h进入指数生长期;DES对HepG2.2.15和HepG2细胞株的增殖有抑制作用,与DDP相当（p＞0.05）;与对照组相比,DES和DDP均可增加处于S期细胞数并减少G2/M期细胞数,阻碍了肿瘤细胞的分裂生长,两者效果相比,没有显著差异;DES和DDP均能促进细胞凋亡,降低磷酸化NF-kB/p65的表达,并明显干预HBx蛋白的表达（p＜0.05）,但二者间差别无统计学意义。HBx蛋白可促进磷酸化NF-kB/p65的表达。结论:1 DES对HepG2.2.15细胞株的增殖有抑制作用;2 DES对HepG2.2.15细胞株细胞周期有明确影响;可促进细胞凋亡的表达并抑制HBx蛋白表达;3 DES可降低HepG2.2.15细胞株磷酸化NF-kB/p65的表达。

论文目录

主要缩略词中英文对照表

摘要

ABSTRACT

前言

实验一细胞接种浓度和加药时间的筛选

1.1 实验材料与方法

1.2 实验结果

1.3 讨论

参考资料

实验二药物敏感试验

2.1 实验材料与方法

2.2 实验结果

2.3 讨论

参考文献

实验三免疫荧光法检测HepG2.2.15细胞HBx蛋白的表达

3.1 实验材料与方法

3.2 实验结果

3.3 讨论

参考资料

实验四 DES对HepG2.2.15细胞细胞周期、凋亡表达的影响

4.1 实验材料与方法

4.2 实验结果

4.3 讨论

参考资料

实验五 DES对HepG2.2.15细胞NF-kB/p65表达的影响

5.1 实验材料与方法

5.2 实验结果

5.3 讨论

参考资料

全文总结

附录在校期间发表论文及参研课题

致谢

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