白藜芦醇诱导人食管Eca109细胞凋亡及其相关基因表达的实验研究

论文摘要

目的:通过白藜芦醇（Resveratrol,Res）体外培养人食管癌Eca109细胞,研究白藜芦醇对人食管癌Eca109细胞的促凋亡作用及其对凋亡相关基因survivin,bcl-2和bax表达的影响,进而探讨白藜芦醇作为潜在的治疗食管癌的抗肿瘤药物诱导食管癌细胞凋亡的机制,为今后临床治疗食管癌提供可靠的实验依据。方法:本研究选用不同浓度,不同作用时间的白藜芦醇与人食管癌Eca109细胞于37℃,饱和湿度5%CO2条件下共同孵育。1通过MTT法分析白藜芦醇对Eca109细胞生长增殖的抑制作用;2通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜、HE染色后光学显微镜观察白藜芦醇作用于Eca109细胞后细胞的形态学改变;3用流式细胞术的方法检测白藜芦醇对Eca109细胞的促凋亡的作用及对细胞周期分布的影响;4用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测白藜芦醇处理细胞后survivin,bcl-2和bax mRNA的表达水平;5用流式细胞术的方法检测白藜芦醇对Eca109细胞的survivin,bcl-2和bax蛋白表达的影响。结果:1 MTT分析白藜芦醇抑制细胞生长的结果:0μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、100μg/ml浓度的白藜芦醇分别作用于人食管癌Eca109细胞24h、48h和72h后,白藜芦醇抑制人食管癌Eca109细胞生长增殖呈一定的时间-剂量依赖性,生长抑制率最高可达76.42%±0.04%（p<0.01）。2形态学变化:倒置相差显微镜下观察,用药组的细胞生长明显被抑制,胞浆内颗粒增多增粗,部分细胞变圆悬浮于培养基中;透射电子显微镜和HE染色后光镜观察发现白藜芦醇能诱导Eca109细胞呈现出典型的细胞凋亡特征,如细胞体积变小,染色质浓缩等。3流式细胞术分析细胞凋亡的结果:20μg/ml、40μg/ml的白藜芦醇作用于Eca109细胞72h后,G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰。凋亡率分别为8.54%±0.52%和18.79%±0.73%（p<0.01）,用药后的细胞G0/G1期比例增高,与对照细胞（未用药的Eca109细胞）的38.0%±1.53%相比,分别上升至51.5%±1.70%和62.4%±1.82%（p<0.01）,而细胞的S期和G2/M期的比例均减小。4 RT-PCR法分析mRNA表达的结果:经20μg/ml、40μg/ml的白藜芦醇作用于Eca109细胞72h后,随着药物浓度的增加,survivin mRNA,bcl-2 mRNA的表达逐渐降低;而bax mRNA的表达逐渐升高。5流式细胞术分析蛋白表达的结果:20μg/ml、40μg/ml的白藜芦醇作用于Eca109细胞72h后,Survivin,bcl-2蛋白表达降低,荧光指数分别为0.82±0.04,0.69±0.06（p<0.01）;0.91±0.03,0.74±0.04（p<0.01）。bax蛋白表达升高,荧光指数为1.05±0.03,1.17±0.04（p<0.05）。结论:1白藜芦醇能明显抑制人食管癌Eca109细胞的生长增殖;2白藜芦醇在一定浓度范围内能有效的诱导人食管癌Eca109细胞凋亡,使Eca109细胞周期阻滞在G0/G1期;3白藜芦醇能够影响凋亡相关基因survivin,bcl-2和bax在Eca109细胞中的表达。因此,白藜芦醇诱导Eca109细胞凋亡的机制可能与促进bax的表达,抑制survivin和bcl-2的表达有关。白藜芦醇诱导人食管癌Eca109细胞凋亡进一步说明,作为一种潜在的抗肿瘤药物,白藜芦醇对治疗食管癌有着很好的应用前景,本研究将为今后临床上治疗食管癌提供有力的实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文白藜芦醇诱导人食管癌 Eca109 细胞凋亡及其相关基因表达的实验研究
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述白藜芦醇抗癌作用机制的研究进展
• 致谢
• 个人简历