论文摘要
背景:癫痫是常见的中枢神经系统变性性疾病之一。其中颞叶癫痫60-70%发展成为难治性癫痫（Intractable epilepsy）,而且由于反复发作和长期用药的毒副作用导致难治性癫痫病人常并发学习记忆功能障碍,其机制的深入探讨以及筛选新药乃需采用难治性癫痫动物模型进行实验研究。目的:本研究采用难治性癫痫大鼠模型,探讨前深梨状皮层T区的胆碱乙酰转移酶（ChAT）免疫反应阳性乙酰胆碱（Ach）能神经元变化与蝎毒耐热蛋白（Scorpion Venom Heat -Resistant Protein,SVHRP）改善难治性癫痫大鼠的空间学习记忆障碍的关系。方法:50只大鼠一次颈部皮下注射惊厥剂量（10mg/kg）的KA,诱发SD大鼠出现癫痫持续状态（status epilepticus SE）。SE后被随机分为实验组（ SE+NS ）和实验给药组（ SE+SVHRP ） ,并分别经腹腔注射SVHRP（0.25mg/kg）和等容积生理盐水连续10天。同时,另选30只正常大鼠被一次给予颈部皮下注射等容积（2.0ml/kg）的生理盐水后,亦被随机分为两组,分别为盐水对照组（NS+NS）和盐水给药组（NS+SVHRP）,并分别经腹腔注射SVHRP（0.25mg/kg）和等容积生理盐水连续10天。SE后10天,上述各组动物均被给予阈下剂量（5mg/kg）的KA,检测该动物是否出现对癫痫剌激的敏感性进行性提高。用Morris水迷宫测定动物的空间学习记忆能力。其后用免疫组织化学方法比较各组动物前深梨状皮层T区ChAT免疫反应阳性的乙酰胆碱（Ach）能神经元数目变化。计量资料用均数±标准差表示,方差分析进行组间均数差异性比较,P<0.05为有显着性差异。结果:1、行为学结果:SD大鼠（n=50）在注射惊厥剂量（10mg/kg）KA后,0-30min内动物出现凝视,湿狗样抖动（wet dog shake,WDS）等前驱症状;30-60min内动物出现1-5级癫痫发作;60-90min内动物反复自发出现4-5级癫痫发作;其后动物癫痫发作持续时间延长,间隔变短伴有大量唾液分泌,出现各种精神运动症状,呈现SE,SE后10天,用阈下剂量（5mg/kg）KA检测动物对癫痫刺激的敏感性。SE+NS组有9只大鼠出现4-5级发作,其中5级发作5只,4级发作5支,3级发作2只;SE+SVHRP组有4只4-5级发作,中有3只出现5级发作;1只出现4级癫痫发作;2只出现3级发作;3只出现2级发作;4只出现1级发作;余下3只均未出现发作。NS+NS组和NS+SVHRP30只大鼠未出现对癫痫刺激敏感性增强。经有序变量的秩和检验,发现SE+NS组大鼠的癫痫发作级别明显大于NS+NS组大鼠,差异有显著性结（p<0.05）,提示SE诱发的难治性癫痫大鼠对癫痫刺激敏感性明显增强。同时发现SE+SVHRP组大鼠的癫痫发作级别明显小于SE+NS组大鼠,差异有显著性结（p<0.05）,提示SVHRP明显抑制难治性癫痫对癫痫刺激的敏感性。2、水迷宫结果:与实验给药组、盐水对照组、盐水给药组大鼠相比。实验组大鼠的寻找潜伏期在各个时间段都明显延长,选择性搜索策略差,穿越平台的次数减少,减少在目标象限（TR）而增加对侧象限（OP）的游泳路径和时间所占总路程和总时间的百分比。3、免疫组化结果:实验组前深梨状皮层T区ChAT免疫反应阳性的乙酰胆碱（Ach）能神经元数目明显少于实验给药组、盐水对照组、盐水给药组,而其它三组大鼠前深梨状皮层T区的ChAT免疫反应呈阳性Ach能神经元神经元数目无明显区别。结论:1、SE诱发的难治性癫痫大鼠对阈下癫痫剌激的敏感性进行性增强;难治性癫痫大鼠前深梨状皮层T区胆碱能神经元有明显变性脱失;2、SVHRP对难治性癫痫发作敏感性的进行性增强有明显的抑制作用;SVHRP对难治性癫痫大鼠前深梨状皮层T区胆碱能神经元有明显保护作用;3、SVHRP能明显减轻难治性癫痫动物的空间学习记忆障碍,这很可能与其能减轻前深梨状皮层T区胆碱能神经元的变性脱失和降低难治性癫痫大鼠癫痫发作敏感性有关。但是两者孰是因果,尚难分辩。