注射用比阿培南人血浆中检测方法优化及健康人体内药代动力学研究

论文摘要

比阿培南（biapenem）是一种新型碳青霉烯类抗生素,其抗菌机理主要是通过抑制细菌细胞壁的合成发挥抗菌作用,抗菌谱广、抗菌活性强,对革兰阴性及革兰阳性需氧菌和厌氧菌等均具有抗菌作用,且较少发生其他β-内酰胺类抗生素常见的细菌耐药性问题。在临床上注射用比阿培南适用于治疗由敏感细菌所引起的败血症、肺炎、肺部脓肿、慢性呼吸道疾病引起的二次感染、难治性膀胱炎、肾盂肾炎、腹膜炎、妇科附件炎等。注射用比阿培南对人肾脱氢肽酶-I（DHP-I）稳定,可单独给药而不需与DHP-I抑制剂合用;药物可有效透过血脑屏障,能够在临床上应用于脑膜炎患者的治疗;因刺激中枢神经系统诱发癫痫的可能性极小。目的优化人血浆中比阿培南的高效液相色谱检测方法,建立高效、灵敏、专一、便捷的人血浆中比阿培南药物浓度检测方法,并对某厂家在某种制剂工艺条件下生产的注射用比阿培南进行质量评价,以探明不同生产厂家不同制剂环境、不同制剂工艺情况下,所生产的药物体内处置规律与特点,为完成该药的临床申报提供Ⅰ期临床资料,为Ⅱ期临床试验提供基础,为临床应用提供依据。方法本研究共分以下二部分第一部分通过对样品处理过程和检测方法进行考察优化,选定专一性强、灵敏度高、准确性好的高效液相色谱检测方法。检测步骤:精密吸取200μL血浆,加入20μL0.1 mg/mL的内标液,涡旋10 s,加入100μL 7%的硫酸锌水溶液,涡旋3 min,混匀,于16000r·min-1离心5 min,吸取上清液进样分析,进样量为20μL。第二部分研究单次及多次静脉滴注注射用比阿培南后的药代动力学特征。将30名健康受试者随机平行分为3组,每组健康受试者各10名（男女各半）,低剂量组单次静脉滴注150mg ;中剂量组单次静脉滴注300 mg;高剂量组单次静脉滴注600 mg;用0.9%氯化钠注射液稀释,每名受试者输液的总体积均为100mL,静脉滴注时间为1 h,于给药前0 h、开始给药15 min,30 min,45 min,1.0 h,给药结束后30 min,1.0 h,1.5 h, 2.0 h, 2.5 h ,4.0 h, 6.0 h由另侧前臂静脉取血4 ml/人/次,置无菌肝素抗凝的试管中,离心分离出血浆置无菌试管中,于-20℃保存。中剂量组的受试者单次给药结束后开始多次给药试验,给药剂量为300 mg/次（药液稀释方法同单次给药）,1天2次,连续给药5天,每次静脉滴注时间均为1.0 h（单次给药算第1天,第5天只给药一次）。于第2、3、4、5天早晨给药前及第5天早晨给药后给药30 min, 1.0 h,给药结束后15 min, 30 min, 1.0 h, 1.5 h, 2.0 h, 2.5 h,3.0 h, 4.0 h, 6.0 h, 8.0 h前臂静脉取血4 ml/人于肝素试管中,分离出血浆,-20℃保存待测。用HPLC法测定血浆中比阿培南的浓度,用DAS2.0计算药动学参数。结果1.本试验建立的血浆中注射用比阿培南的HPLC测定方法,血浆中杂质不干扰样品的测定;标准曲线线性范围为0.2μg·mL-1-50μg·mL-1,线性关系良好;最低检测限为0.2μg·mL-1;高、中、低三种浓度的批内和批间精密度RSD均小于15.0%;提取回收率在73 %-75 %;符合生物样品测定要求。2.30名健康受试者单次静脉滴注不同剂量注射用比阿培南（150 mg,300 mg,600 mg ）后,其体内药代动力学参数分别为:Tmax:0.93±0.12h,1.01±0.16h,1.00±0.00h,Cmax:8.92±4.13mg·L-1,19.07±3.08mg·L-1,28.01±6.95mg·L-1;t1/2:1.47±0.23h,0.98±0.26h,1.90±0.53h;AUC0-t:11.24±3.09mg·h·L-1,22.15±3.96mg·h·L-1,35.58±4.65mg·h·L-1;AUC0-∞:12.01±3.12mg·h·L-1,22.51±3.99mg·h·L-1,37.27±5.01mg·h·L-1;CL/F : 0.013±0-003L·h-1,0.007±0. 001L·h-1,0.016±0.002L·h-1。10名受试者多次静脉滴注注射用比阿培南,300 mg/次,每天2次连续给药5天,在给药第2天时注射用比阿培南已达稳态血药浓度,稳态平均血药浓度为0.68±0.11 mg·L-1,稳态血药浓度波动度为5.81±1.65,蓄积常数为0.96±0.02。以连续给药第5天的血药浓度数据估算的注射用比阿培南多次给药后的消除半衰期为1.68±0.37 h,AUC0-t为24.69±2.81 mg·h·L-1,达峰时间和达峰浓度分别为1.00±0.00 h和18.97±6.04 mg·L-1。结论1.本实验建立的人血浆中比阿培南的HPLC检测方法精密度,准确性,选择性,重现性良好。血浆中比阿培南的浓度在0.2 -50μg·mL-1范围内时,线性关系良好,r达0.999。检测波长为300 nm,样品峰的平均保留时间约为3.95min,最低检测限为0.2μg·mL-1,高、中、低浓度日内、日间精密度的变异系数均小于5%,方法及提取回收率均大于75%。所有效能指标均符合关于进行药代动力学研究的试验要求。2.将受试者的经时血药浓度分别录入DAS2.0程序,选择最佳权重与房室模型,将受试者的数据按剂量组进行成批数据分析,30名健康受试者单剂量静滴比阿培南后,低、中、高3个剂量组的消除半衰期t1/2分别为（1.15±0.17）,（1.06±0.28）,（1.05±0.06）h,3个剂量组的t1/2基本一致,表明比阿培南在150-600 mg内呈一级消除动力学;低、中、高3个剂量组的Cmax分别为（8.92±0.41）,（19.07±3.08）和（35.60±6.95）mg·L-1 ; AUC0-t分别为（11.17±3.01）,（22.14±3.97）,（45.26±3.85）mg·L-1·h,结果显示,Cmax和AUC0-t与给药剂量呈线性相关（P<0.001）表明比阿培南在150-600 mg内呈线性药代动力学特征,回归方程分别为Cmax=0.0587X-0.655（R2=0.9972）和AUC0-t h=0.0759X-0.39 （R2=0.9998）。多次给药的t1/2、Cmax、AUC0-t分别为（1.21±0.13）h、（22.14±3.97）mg·L-1·h、（18.96±6.03）mg·L-1·h多次给药与单次给药相比药动学数据无显著差异,表明比阿培南在体内无蓄积。3.本研究得到的药动学参数与国外文献报道的药动学参数基本一致,研究中未见不良反应发生,表明注射用比阿培南在此浓度下有良好的安全性。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 碳青霉稀类抗生素比阿培南的研究进展
• 1 感染的概念
• 2 抗生素的分类
• 3 比阿培南的研究进展
• 第一部分 注射用比阿培南人血浆中检测方法的优化及确定
• 1 材料与方法
• 2 方法学验证结果
• 3 讨论
• 第二部分 注射用比阿培南在健康受试者体内的药代动力学
• 1 受试者的选择
• 2 试验药物
• 4 给药途径及确定依据
• 5 剂量及确定依据
• 6 生物样本采集及试验过程
• 7 药动学参数的估算
• 8 注射用比阿培南血药浓度—时间曲线
• 9 药动学参数
• 10 单次给药与多次给药药动学参数比较
• 11 注射用比阿培南在人体中药代动力学研究评价
• 小结
• 参考文献
• 附录
• 个人简历和研究成果
• 致谢