“宝元灵”的抗肿瘤作用及其机理研究

论文摘要

蜂产品的抗癌功效已为世人所熟知,其中蜂毒、蜂胶、蜂王浆等的抗癌效果尤佳。“宝元灵”就是以蜂产品为主要原料的抗癌产品。本论文以“宝元灵”为试验品,进行了其抗肿瘤作用及其机理的研究。研究结果如下：1.通过建立S180荷瘤小鼠模型和MTT法测定肿瘤细胞的体外抑制活性,研究宝元灵对S180肿瘤的抑制作用。结果显示,宝元灵能够抑制S180荷瘤小鼠移植瘤的生长,有效抑癌剂量范围是0.5mg/kg/2d～2.5mg/kg/2d,最佳给药剂量为2.0mg/kg,最佳给药间隔为2d,最高抑癌率为57.45%。宝元灵能够有效提高小鼠的胸腺指数,能够有效抑制体外培养S180细胞的增殖。2.建立H22肝癌小鼠实体瘤模型、腹水瘤模型并采用MTT法测定肿瘤细胞的体外抑制活性,研究宝元灵对H22肝癌的抑制作用。结果显示,宝元灵能够抑制H22荷瘤小鼠移植瘤的生长,有效剂量为0.5mg/kg/2d～2.5mg/kg/2d,最佳给药剂量为2.0mg/kg/2d,最高抑癌率为54.50%。在0.5mg/kg～2.5mg/kg范围内,宝元灵能够有效延长腹水型H22肝癌小鼠的生存时间,最佳给药剂量为2.5mg/kg,最佳给药间隔为2d,生命延长率最高达40.14%。宝元灵可在体外有效抑制H22肿瘤细胞的生长。3.采用动物的急性毒理实验计算宝元灵的半数致死量（LD50）,结果表明,宝元灵的半数致死量（LD50）为20.54mg/kg, LD50（Feiller校正）95%的可信区间为19.974～21.117mg/kg o4.采用小鼠碳粒廓清实验并通过研究宝元灵对巨噬细胞及其因子的影响,初步探讨了宝元灵的免疫调节功能。结果表明,宝元灵能够提高小鼠碳粒廓清能力,对患病小鼠的免疫功能有较强的促进作用。宝元灵能够诱导小鼠巨噬细胞提高吞噬中性红的能力,增加巨噬细胞能量代谢水平,有效添加范围为0.25μg/mL～1.5μg/mL,当药物浓度为1.5μg/mL时,巨噬细胞的吞噬能力最强,细胞能量代谢水平最高。在适宜的剂量范围内,宝元灵能促进IL-2的产生,在细胞水平上明显增加细胞介导免疫作用。5.光学显微镜法和TUNEL法显示,宝元灵对肿瘤细胞细胞核和细胞器有损害作用,促使肿瘤细胞凋亡与坏死。6.采用RT-PCR法研究宝元灵对线粒体呼吸链相关基因及肿瘤增殖相关基因的mRNA的表达情况,结果发现,宝元灵抑制线粒体呼吸链相关基因NDUFS1、SUCLG1mRNA的表达,损伤肿瘤细胞线粒体。宝元灵能够增加肿瘤组织中抑癌基因PTEN、P21的mRNA的表达,抑制癌基因AKT1、AKT2的mRNA的表达。

论文目录

• 缩略词
• 摘要
• Abstract
• 第一章 文章综述
• 1 肿瘤的治疗方法
• 1.1 肿瘤生物免疫疗法
• 1.2 中医蜂疗
• 2 天然药物抗癌活性成分和抗肿瘤作用机制
• 2.1 天然药物抗癌活性成分
• 2.2 天然药物抗肿瘤作用机制
• 3 蜂产品的有效抗癌成分、抗癌作用研究进展
• 3.1 蜂产品的有效抗癌成分
• 3.2 蜂产品的抗肿瘤研究进展
• 4 本研究的目的与意义
• 5 本项目的研究内容和拟解决的关键问题
• 5.1 研究的内容
• 5.2 拟解决的关键问题
• 第二章 “宝元灵”抗肿瘤作用的研究
• 180肿瘤抑制作用试验研究'>第一节 “宝元灵”对S₁₈₀肿瘤抑制作用试验研究
• 1 材料
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验动物和瘤株
• 1.3 实验仪器
• 2 实验方法
• 180荷瘤小鼠移植瘤的抑制作用'>2.1 宝元灵对S₁₈₀荷瘤小鼠移植瘤的抑制作用
• 180肿瘤细胞的体外抑制作用'>2.2 宝元灵对S₁₈₀肿瘤细胞的体外抑制作用
• 3 结果与分析
• 180荷瘤小鼠移植瘤抑制作用结果'>3.1 宝元灵对S₁₈₀荷瘤小鼠移植瘤抑制作用结果
• 180肿瘤细胞的体外抑制活性'>3.2 宝元灵对S₁₈₀肿瘤细胞的体外抑制活性
• 22肝癌的抑制作用研究'>第二节 宝元灵对H₂₂肝癌的抑制作用研究
• 1 材料
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验动物和瘤株
• 1.3 实验仪器
• 2 实验方法
• 22肝癌小鼠移植瘤的抑制作用'>2.1 宝元灵对H₂₂肝癌小鼠移植瘤的抑制作用
• 22肝癌小鼠的生命延长率'>2.2 宝元灵对腹水型H₂₂肝癌小鼠的生命延长率
• 22肝癌细胞的抑制作用'>2.3 宝元灵对体外培养H₂₂肝癌细胞的抑制作用
• 3 结果与分析
• 22肝癌小鼠移植瘤的抑制作用结果'>3.1 宝元灵对H₂₂肝癌小鼠移植瘤的抑制作用结果
• 22肝癌小鼠的生命延长率'>3.2 宝元灵对H₂₂肝癌小鼠的生命延长率
• 22肝癌细胞的抑制活性'>3.3 宝元灵对体外培养H₂₂肝癌细胞的抑制活性
• 第三节 宝元灵急性毒理研究
• 1 材料
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验动物和瘤株
• 2 实验方法
• 3 结果与分析
• 第四节 本章小结
• 第三章 宝元灵抗肿瘤作用的机理研究
• 第一节 宝元灵对荷瘤小鼠的免疫调节功能
• 1 材料
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 荷瘤小鼠碳粒廓清实验
• 2.2 宝元灵对小鼠腹腔巨噬细胞及其细胞因子的影响
• 3 结果与分析
• 3.1 宝元灵对荷瘤小鼠碳粒廓清能力的影响
• 3.2 宝元灵对小鼠腹腔巨噬细胞及其细胞因子的影响
• 第二节 宝元灵促使肿瘤细胞凋亡的试验研究
• 1 材料
• 1.1 药品和试剂
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 2.1 光学显微镜法观察肿瘤细胞凋亡
• 2.2 TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡
• 3 结果与分析
• 180肿瘤组织细胞凋亡的试验结果'>3.1 光学显微镜观察S₁₈₀肿瘤组织细胞凋亡的试验结果
• 3.2 TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡情况的实验结果
• 第三节 宝元灵对线粒体及肿瘤细胞相关基因mRNA表达的影响
• 1 实验材料
• 1.1 药品和试剂
• 1.2 实验仪器
• 2 实验方法
• 22肝癌小鼠移植瘤线粒体呼吸链相关基因mRNA表达的影响'>2.1 宝元灵对H₂₂肝癌小鼠移植瘤线粒体呼吸链相关基因mRNA表达的影响
• 22肝癌细胞增殖相关基因的调节作用'>2.2 宝元灵对H₂₂肝癌细胞增殖相关基因的调节作用
• 3 结果与分析
• 22肝癌小鼠移植瘤线粒体呼吸链相关基因mRNA表达的影响'>3.1 宝元灵对H₂₂肝癌小鼠移植瘤线粒体呼吸链相关基因mRNA表达的影响
• 22肝癌细胞增殖相关基因的影响'>3.2 宝元灵对H₂₂肝癌细胞增殖相关基因的影响
• 第四节 本章小结
• 1 宝元灵对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用
• 2 宝元灵对肿瘤细胞凋亡的诱导作用
• 第四章 结论与展望
• 1 本研究的结论
• 2 本研究的创新点
• 3 本研究的不足以及今后研究的思路
• 参考文献
• 附录
• 致谢