论文摘要
1947年,Rubarth最先描述了犬的传染性肝炎,故犬传染性肝炎（Infectious canine hepatitis virus,ICHV）又名罗巴斯病病毒（Rubarthdisease virus）,1959年,Kapsenberg分离获得该病毒,1962年,Ditchfiekd等又分离获得单纯引起呼吸道病变而不引起犬肝炎的腺病毒,即A26株（多伦多A26/61）。有人将ICHV称为Ⅰ型（CAV-I）,将A26病毒称为犬传染性喉气管炎病毒,即Ⅱ型,Ⅱ型是Ⅰ型的一个变异株。1984年夏咸柱等在我国首次分离犬传染性肝炎病毒,证明我国犬中也有Ⅰ型腺病毒的感染。近几年来在我国的黑龙江、广西、北京等地都有病例发现。且发病范围广泛:包括警犬、家养宠物犬、实验犬等,尤其对皮毛养殖动物也有很大的危害,一旦感染会造成巨大的经济损失。目前,对CAV-I的研究主要集中于对CAV-I的快速检测、诊断、治疗药物和疫苗的研究,并取得了一定的进展。ICHV有15种多肽,其中的六邻粒、五邻粒基底及纤突、2个内部多肽（V和VI）和衣壳蛋白,约占总蛋白量的90%以上,这就为实验室检测方法的研究提供了靶向和依据。目前,大多数的动物病毒感染性疾病缺乏有效的治疗药物,所以准确快速的诊断已成为控制病毒性传染性疾病流行和蔓延的一个重要手段。对CAV-I的特异性诊断主要依靠病毒分离、血清学诊断和临床症状。病犬的临床症状一般表现为:初期怕冷,精神轻度沉郁,并且有水样鼻液和眼泪,体温高达41℃,且体温呈“马鞍”型变化,稽留4-6天,并随病程的进展而出现呼吸和脉搏增数,全身无力、食欲不振、腹部压痛、下泻、呕吐、出血和水肿等各种症状。但这些症状往往和犬类的其它疾病相似（例如:犬瘟热）,缺乏特异性,如果不建立相应的特异性抗体检测手段,不能及时准确诊断,就会使病犬的数量增多,扩大传染范围,如果传染给皮毛养殖动物,例如:狐狸、熊等则会带来更大的经济损失。因此,建立快速、准确、安全、有效的CAV-I病毒特异性抗体实验室检测方法对于准确诊断、研制疫苗都具有非常重要的意义。对CAV-I病毒感染实验室诊断方法的选择,可根据动物对CAV-I的感染潜伏期的长短,以及机体的免疫应答,来选择检测病毒抗原、抗体或病毒核酸等作为诊断的指标。CAV-I自然接触后的潜伏期为69天,人工接种的潜伏期为36天。机体的免疫系统会先后产生抗病毒特异性IgG抗体,检测特异性的抗体可作为CAV-I病毒感染的诊断指标。本课题是利用分子生物学方法表达病毒特异性蛋白pIX,经纯化后建立抗原蛋白血清学诊断方法。由于蛋白纯度高、无传染性,易大规模生产和标准化,对建立一种快速准确的CAV-I病毒检测方法,对筛选防制CAV-I病毒的治疗药物以及研制对付CAV-I病毒有效的疫苗都具有重要的理论意义和实际应用价值。研究表明ELISA诊断方法具有快速简便、灵敏性高、特异性强等优点,是进行CAV-I诊断和免疫监测的重要工具。本文以表达的蛋白为抗原建立的间接ELISA法,用于检测血清ICHV病毒IgG抗体。试验表明应用表达的蛋白作为诊断ICHV抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低廉等优点。CAV-I血清学诊断方法的建立,将为临床CAV-I病毒感染提供可靠的诊断依据,有助于进一步完善临床诊断标准,而且对CAV-I病毒的流行病学的调查研究和疫苗免疫效果的监测具有非常重要的应用价值。