论文摘要
乳腺癌细胞对化疗药物产生的多药耐药（Multi-drug resistance，MDR）是导致化疗失败的重要原因。MDR逆转剂是克服肿瘤细胞多药耐药性的传统方法，但逆转剂在克服MDR的同时也带来了很强的副作用，因此本研究通过低频脉冲电场对乳腺癌MCF-7／ADR细胞多药耐药性的逆转研究，寻找克服肿瘤细胞多药耐药的新方法。本研究以对肿瘤化疗药物高耐受、P-gp过量表达的MDR人乳腺癌MCF-7／ADR细胞为模型，采用MTT检测方法对三种不同低频脉冲电场作用方式进行筛选，选择对细胞生长影响较小的电场作用方式用于逆转MCF-7／ADR多药耐药逆转的研究。同时使用该电场作用方式通过MTT检测筛选逆转MDR效果最佳的电场处理时间，并且通过P-gp特异性底物DiOC2（3）在MCF-7／ADR中的积聚和外排探究低频脉冲电场的抗多药耐药的作用机理。通过低浓度药物诱导的MCF-7／ADR对ADR和DNR是诱导前细胞的12.582倍和2.765倍，并且对HHT和VCR显示出非常高的耐药性，其耐药指数（RF）分别为37.141和620.558。诱导后的MCF-7／ADR对P-gp特异性底物DiOC2（3）的积聚效果明显较弱，显示耐药性的提高是由于P-gp的过量表达导致的。低频脉冲电场对诱导后的MCF-7／ADR细胞生长的影响程度取决于电场作用方式。低频脉冲电场作用于MCF-7／ADR细胞（电场Ⅱ组）对细胞生长的影响较小，P＞0.01（45分钟电场除外），因此最适合作为逆转MDR的电场处理方式。低频电场同时作用于MCF-7／ADR细胞和培养液（电场Ⅰ组）对细胞生长抑制较大，随电场处理时间增加抑制作用增强。由于电场Ⅰ组细胞差异较大P＜0.05，因此不适合作为逆转MDR的电场方式，而适合作为抑制细胞生长的电场处理方式。低频脉冲电场作用于培养液（电场Ⅲ组）对细胞生长的影响不是很大，但是在电场作用15分钟组、30分钟组和45分钟组内，都表现出明显地促进乳腺癌MCF-7／ADR细胞的生长，因此认为不适合作为研究乳腺癌治疗的低频电场作用方式。低频电场逆转乳腺癌MCF-7／ADR对HHT和VCR多药耐药的研究中，在低频脉冲电场不影响MCF-7／ADR细胞生长的情况下（电场Ⅱ组），不同时间的电场作用均能逆转MCF-7／ADR的多药耐药，对HHT耐药性的逆转倍数在1.429-1.848之间，对VCR耐药性的逆转倍数在1.473-2.090之间，45min电场作用的逆转效果最好，其次是30min电场作用。药物积累和外排的实验结果表明，脉冲电场作用45min能使细胞内的DiOC2（3）（P-gp的特异性荧光底物）积累明显增加，而30min电场作用能显著抑制DiOC2（3）的外排。促进药物积累和抑制其外排是脉冲电场逆转多药耐药的机理之一。综上所述，本研究可得出以下结论：（1）通过低浓度诱导能够获得P-gp过量表达的高耐药性MCF-7／ADR细胞（2）低频电场只作用于MCF-7／ADR细胞（电场Ⅱ组）对细胞生长无显著的影响作用，适合成为逆转MDR的方法。（3）低频电场同时作用于MCF-7／ADR细胞和培养液（电场Ⅰ组）对细胞生长有显著的抑制作用，适合成为杀伤和抑制肿瘤细胞的方法。（4）低频电场只作用于培养液（电场Ⅲ组）对细胞的生长的影响较小，但主要表现为促进细胞的生长，不适合作为治疗肿瘤细胞研究的方法。（5）电场Ⅱ组对MCF-7／ADR的多药耐药性有逆转作用，45分钟组的逆转效果最佳，其次为30分钟电场组。（6）电场Ⅱ组中，45分钟组能够促进DiOC2（3）的积聚，30分钟组能够抑制DiOC2（3）的外排，因此这种逆转作用主要与低频脉冲电场对药物积累和药物外排的影响有关。